BPLS agar a Salmonella USP izolálásához
Csomagolás - 500 g
Szelektív agar salmonella izolálására, kivéve S. patológiás anyagból, székletből, vizeletből, élelmiszerből, gyógyszerészeti anyagból stb. Ez a tenyésztőközeg az USP XXIII (1995) és az EP II.
A működés elve
A szalmonella növekedése hozzájárul a gazdag táplálkozási alaphoz. A társult mikroorganizmusok növekedését gátolja a ragyogó zöld növekvő koncentrációja. A szalmonella sem szacharózt, sem laktózt nem fermentál. Ezen cukrok jelenléte lehetővé teszi a gyengén laktóz-pozitív vagy laktóz-negatív, de szacharóz-pozitív mikroorganizmusok azonosítását.
Összetétel (g / l)
Hús Peptone 5,0; kazein pepton 5.0; élesztőkivonat 3,0; nátrium-klorid 5,0; laktóz 10,0; szacharóz 10; fenolvörös 0,08; ragyogó zöld 0,0125; agar-agar 13.0.
előkészítés
51 g táptalajt 1 liter desztillált vízben oldunk, hagyjuk, hogy a közeg 20-30 percig megduzzadjon. Autoklávozzuk 15 percig 121 ° C-on, öntsük csészékbe. A közeg átlátszó, vörös-barna.
pH = 6,9 ± 0,2 25 ° C-on
elemzés
A csészéket közvetlenül a vizsgálati anyaggal oltjuk be, vagy a felhalmozódás után. A vizsgálatokat olyan tápközegekkel kell elvégezni, amelyek minimális számú inhibitorral rendelkeznek.
Inkubáljuk 24 órán át aerob körülmények között 35 ° C-on.
Laktóz-szacharóz agar, ragyogó zöld és fenol piros -
BPLS agar a Salmonella USP izolálásához
Csomagolás - 500 g
Szelektív agar salmonella izolálására, kivéve S. patológiás anyagból, székletből, vizeletből, élelmiszerből, gyógyszerészeti anyagból stb. Ez a tenyésztőközeg az USP XXIII (1995) és az EP II.
A működés elve
A szalmonella növekedése hozzájárul a gazdag táplálkozási alaphoz. A társult mikroorganizmusok növekedését gátolja a ragyogó zöld növekvő koncentrációja. A szalmonella sem szacharózt, sem laktózt nem fermentál. Ezen cukrok jelenléte lehetővé teszi a gyengén laktóz-pozitív vagy laktóz-negatív, de szacharóz-pozitív mikroorganizmusok azonosítását.
Összetétel (g / l)
Hús Peptone 5,0; kazein pepton 5.0; élesztőkivonat 3,0; nátrium-klorid 5,0; laktóz 10,0; szacharóz 10; fenolvörös 0,08; ragyogó zöld 0,0125; agar-agar 13.0.
előkészítés
51 g táptalajt 1 liter desztillált vízben oldunk, hagyjuk, hogy a közeg 20-30 percig megduzzadjon. Autoklávozzuk 15 percig 121 ° C-on, öntsük csészékbe. A közeg átlátszó, vörös-barna.
pH = 6,9 ± 0,2 25 ° C-on
elemzés
A csészéket közvetlenül a vizsgálati anyaggal oltjuk be, vagy a felhalmozódás után. A vizsgálatokat olyan tápközegekkel kell elvégezni, amelyek minimális számú inhibitorral rendelkeznek.
http://www.lab-biomed.ru/107232Tápközeg az enterobaktériumok elsődleges azonosításához a laktóz és a glükóz fermentációja alapján, száraz
Szerda Ressel-RM Obolensk - 0,25 kg-os csomag
Szerda Ressel-GRM Obolensk - sűrű színkülönbség-diagnosztikai közeg, mely a bélcsoport mikrobáinak azonosítására szolgál. Szerda Russell bármilyen módon készíthető: hús vagy kazein a Hottinger szerint (5-6 vagy 4-5 alkalommal elváltozott), élesztő autolizátum (szűrt és hígított 2-szeres), nyitott kandalló stb. —60 ° 1% -os tápanyag-tartalmú agar, adjunk hozzá 4% -os indikátort az Andrade-hoz, állítsuk be a pH = 7,3-7,4 értéket, majd adjunk hozzá 1% laktózt és 0,1% glükózt. A kész környezet Russell átlátszó és enyhén sárgás színű. A táptalajt 10-15 ml-es vizsgálati csövekbe öntjük és autoklávozással t ° 112 ° C-on 20 percig sterilizáljuk. vagy 30 percig 2-3 napig áramló gőz, majd hagyjuk megszilárdulni, hogy az alsó rész oszlop maradjon, és a felső része ferde.
A közepes Ressel-GRM-en történő vetés mély befecskendezéssel történik egy oszlopba, és egy rasseviai löket a kanyarodott rész felületén. A terményt t ° 37 ° -os termosztátba helyezzük, a következő napon pedig figyelembe vesszük az eredményeket. A glükózt erjesztő baktériumok (a dizentéria és a tífusz-paratifoid fertőzések okozói) növekedésével a közeg csak a lövés mélységében fonódik le. A gáz kialakulását a közeg belsejében felhalmozódó buborékok képezik, amelyek intenzív gázképződés esetén az oszlop töréséhez vezetnek. A baktériumok növekedésével, a laktóz (E. coli) erjesztésével, a környezet éles vörösvörösödése, és a lejtős felületen a stroke.
A Russell-tápközeg különböző módosításaiban a glükózt és a laktózt helyettesítik mannit és szacharóz, illetve laktóz-szacharóz-mannit tápközeg; bizonyos esetekben ólom-kloridot adunk a közeghez, hogy rögzítsük a hidrogén-szulfid képződését. A bróm-timol kék, a rózsaolaj, a fenolvörös és a 0,1% -os alkoholos oldat (1,6%) brómkresol lila is használható indikátorként. Néha száraz közeget használnak, mint például a Russell közegét, valamint a száraz Giss adathordozóból álló Ressel-GDM közeget.
Szerda Ressel-GRM Obolensk az enterobaktériumok elsődleges azonosítására a laktóz és a glükóz fermentációja alapján.
Ez egy finom, higroszkópos, fényérzékeny, világos sárga színű por.
Hasnyálmirigy hidrolizált halliszt, nátrium-klorid, glükóz, laktóz, bróm-timol kék, agar.
A meghatározott tápközegsorozat előállításához szükséges mennyiséget 1 liter desztillált vízben keverjük, 2 percig forraljuk, amíg az agart teljesen megolvasztjuk, szűrjük egy pamut-gézszűrőn, 6-8 ml-es steril csövekbe öntjük és autoklávban sterilizáljuk.
20 percig 112 ° C hőmérsékleten Szerdán a kémcsövekben kaszál, így 15-20 mm magas oszlopot hagy.
Az előkészített közeg zöld.
A steril táptalajt 3 hétig lehet használni, feltéve, hogy a hőmérsékletet tároljuk
2-8 ° C-on vagy 3 napon belül 18-25 ° C tárolási hőmérsékleten (a csöveket sötét helyen kell tárolni).
A Ressel-GRM tápközeg szénhidrátokat tartalmaz, amelyek a sav képződésével lebomlanak a bróm-dimol-kék színének változását a zöldtől a sárgáig. Lúgosítva a jelző kék színt ad.
A kutatási mintákat a vonatkozó iránymutatások és a GOST szerint végzik.
A bakteriológiai hurok tenyésztését egy kémcsőbe inokuláljuk egy puffasztószúró közeggel. Inkubálja a hőmérsékletet (37 ± 1 ° C) 18-20 órán keresztül.
http://shop.labprep.ru/product/%D1%81%D1%80%D0%B5%D0%B4%D0%B0-%D1%80%D0%B5%D1%81%D1%81% D0% B5% D0% BB% D1% 8F-% D0% B3% D1% 80% D0% BC-% D0% BE% D0% B1% D0% BE% D0% BB% D0% B5% D0% BD% D1% 81% D0% BA /Laktóz-szacharóz környezet:
Készítse elő a következő receptet:
1) pepton - 5 g (0,5%)
2) nátrium-klorid - 5 g (0,5%)
3) laktóz - 10 g (1%)
4) szacharóz - 1 g (0,1%)
5) agar-agar * - 10 g (1%)
6) Andrea indikátor - 40 ml (4%)
7) desztillált víz - 1 l
Hideg vízhez peptont, nátrium-kloridot, agar-agart adunk. Az elegyet addig melegítjük, amíg az agar teljesen meg nem olvad, majd hozzáadunk laktózt és szacharózt, és az elegyet további 5 percig forraljuk. Az elegyet 20% -os nátrium-hidroxid-oldattal lúgosítjuk 7,4 - 7,6 pH-ra, hozzáadjuk az Andred indikátort. Ezt követően a tápközeget pamutszövet szűrőn átszűrjük, és 5-7 ml steril csövekbe öntjük és 0,5 atm nyomáson sterilizáljuk. (110 0) 20 perc. Az előkészített tápközeget oly módon nyerjük, hogy oszlopot és bongot kapjunk (a Ressel típusának megfelelően). Szerda könnyű.
Szerda Ressel: laktóz-szacharóz közegként készül, de a szacharóz helyett a glükózt ugyanabban a mennyiségben kell bevenni.
Gissa szerdán:
Készítse elő a következő receptet:
1) pepton - 10 g (1%)
2) nátrium-klorid - 5 g (0,5%)
3) szénhidrát - 5-10 g (0,5 - 1%)
4) desztillált víz - 1 l
5) Andrade-jelző - 10ml (1%)
6) vagy 1,6% alkoholos bróm-timol-oldat - 1 ml (0,1%)
7) vagy 0,4% bróm-timol-kék oldat - 1 ml (0,1%)
1% -os peptidvízhez (pH 7,2-7,4) kálium-nitrát (nitrát) nélkül 0,5% -os nátrium-kloriddal 1% -os indikátort adva (vagy 1 ml 1,6% -os bróm-timol-kékoldat vagy 1 ml 0% -os alkoholos oldat). 4% -os bróm-timol-kék oldat, a táptalajt úszóval kémcsövekbe öntjük, és 0,5 percen át (110 ° C) sterilizáljuk 20 percig vagy 3 napig egymás után, egyenlő időben, áramló gőzzel 30 percig.
Hugh Leifson szerda:
Készítse elő a következő receptet:
1) agar - agar * - 3 g (0,3%)
2) pepton - 2 g (0,2%)
3) nátrium-klorid - 5 g (0,5%)
4) kétbázisú kálium-foszfát - 0,3 g (0,03%)
5) glükóz - 10 g (1%)
6) Bromimol-kék - 0,03 g (0,003%)
7) desztillált víz - 1 l
Hideg vízhez peptont, nátrium-kloridot, agar-agart adunk. Az elegyet addig melegítjük, amíg az agar teljesen meg nem olvad, majd hozzáadunk kálium-foszfátot és glükózt, és az elegyet további 5 percig forraljuk. Az elegyet 20% -os nátrium-hidroxid-oldattal lúgosítjuk 7,4 - 7,6 pH-ra, hozzáadjuk a bróm-timol-kék indikátort. Ezt követően a tápközeget pamutszövet szűrőn szűrjük, és steril csövekben 4-5 ml-re öntjük és 0,5 atm nyomáson sterilizáljuk. (110 0) 20 perc.
* - az agar-agar mennyisége függ a minőségétől és minőségétől. Ezért az új agar-agar-tétel megkezdése előtt meg kell vizsgálni a próba főzését a környezethez hozzáadott mennyiség tisztázása érdekében.
Hozzáadás dátuma: 2014-12-11 | Megtekintések: 788 | Szerzői jog megsértése
http://medlec.org/lek-29229.htmlTápanyag-média cég a HiMedia
M581
M1255
M065
M1275
M031
Média rögzítése macskával. Az MU000 megfelel az US Pharmacopoeia, a ME000 - az Európai Gyógyszerkönyv, az M000B - a Brit Gyógyszerkönyv követelményeinek.
* - a közeg alapjához szelektív, differenciáló és / vagy dúsító adalékanyagok szükségesek.
A VITA ROS LLC irodája és raktárja Rostov-on-Don, ul. Malinovsky 52B / 63
- kilátás a Yandex térképre
Termékek szállítása szállítási cégek, postai úton vagy önállóan.
http://vita-ros.ru/content/sreda-himedia-analog-a-oGN Heine húsleves, 500 g (FSZ 2009/03706) „Gram-negatív” húsleves
Módosított Listeria lecitináz agar bázis / módosított lecitináz agar bázis Listeria esetében, 500 g (FSH 2009/03705)
FD045 tojássárgája-emulzió / tojássárgája-emulzió
Marha kivonat por
Húskivonat, száraz (bakteriológiai) / húskivonat, száraz, I. típusú (bakteriológiai), 5x5 kg (FSZ 2009/03707)
Húskivonat por
Húskivonat, száraz (bakteriológiai), 500g (FSZ 2009/03707) / Húskivonat, száraz (bakteriológiai), 500 g (FSZ 2009/03707)
Megjegyzés:
Média rögzítése macskával. Az MU000 megfelel az US Pharmacopoeia, a ME000 - az Európai Gyógyszerkönyv, az M000B - a Brit Gyógyszerkönyv követelményeinek.
* - a közeg alapjához szelektív, differenciáló és / vagy dúsító adalékanyagok szükségesek.
№ 0318300471814000002, 2014.03.07. 17:18 (Moszkva idő)
44-ФЗ, Vásárlás egyetlen szállítótól (vállalkozó, előadó)
A dokumentumok megtekintése a rendszerben, még akkor is, ha
zakupki.gov.ru nem működik, fizetnie kell a rendszerért.
INN 2358004247 KPP 235801001
Agar minőségellenőrzési tanulmány
OKPD 85.14.16.120 Farmakológiai és bakteriológiai laboratóriumok szolgáltatásai
Pepton minőségellenőrzési tanulmány
OKPD 85.14.16.120 Farmakológiai és bakteriológiai laboratóriumok szolgáltatásai
A tápközeg minőségének ellenőrzésére vonatkozó kutatások (laktóz-szacharóz közeg)
OKPD 85.14.16.120 Farmakológiai és bakteriológiai laboratóriumok szolgáltatásai
http://zakupki.kontur.ru/0318300471814000002Az ipari biotechnológiáról szóló oldal
Tápközeg (A-M)
1% pepton víz. 1% -os peptonvíz előállításához a koncentrált oldatot desztillált vízzel 10-szer hígítjuk. 8,5 ± 0,1 pH-érték meghatározása után a vizsgálati csövekbe vagy ampullákba öntjük, és 20 percig sterilizáljuk 0,7 atm nyomáson. Ön készíthet 1% -os peptonvizet és közvetlenül az egyes komponensekből, a mintát 10-szer kevesebb, mint a fő pepton receptében feltüntetett mintákat. Az előállítási technológia megegyezik a fő peptonnal.
2% -os sóoldat. 1 liter desztillált vízhez: g: nátrium-klorid - 20; nátrium-hidroxid - 0,1. A folyadékot egy papírszűrőn vezetjük át, 10 ml-re öntjük kémcsövekbe, és autoklávban sterilizáljuk 20 percig 0,7 atm nyomáson.
Agar közeg. 1 liter desztillált vízhez, g: agar - 15-20. A tápközeg előállítása: 15-20 g agart adunk 1 liter vízhez, melegítéssel oldjuk és 30 percig sterilizáljuk 1 atm gőznyomáson.
Bean Agar. 1 liter vízben 100 g fehér babot vagy fehérbabot főzzünk, amíg meg nem száradnak, elkerülve a bab repedését és a keményítő pasztává alakítását. A táptalajt forrón szűrjük és 2% agart adunk hozzá. Az autoklávban szokásos módon sterilizáljuk.
Bableves. 50 g babot (jobb, mint a fehér) öntsünk 1 liter csapvizet, és forraljuk fel, amíg a főtt, hogy a bab nem forraljon puha. A kapott levest vattán át szűrjük, hozzáadunk 10 g cukrot, és az eredeti térfogathoz jutunk. A tápközeg enyhén lúgos reakcióját állítjuk elő, lombikba öntjük és autoklávban sterilizáljuk 1,5 atm gőznyomáson 30 percig.
Clark Broth. 1 liter desztillált vízhez: g: pepton - 5; glükóz - 5; kétbázisú kálium-foszfát - 5. Az összetevők keverékét addig melegítjük, amíg teljesen fel nem oldódik, majd szűrőpapíron át szűrjük és steril csövekbe öntjük. A táptalajt 0,5 atm nyomáson sterilizáljuk.
Hottinger húsleves. A papagáj Hottinger vízzel hígítva 5-6-szor, attól függően, hogy mennyi amino-nitrogént tartalmaz, és mennyit kell a húslevesben feltüntetni (feltüntetve az emésztési útlevélben és a közeg receptjén). Például 1,2 g / l amino-nitrogént tartalmazó tápközeg előállításához 9,0 g / l koncentrációjú emésztést 7,5-szer kell hígítani (9,0: 1,2). A hígított emésztéshez 0,5% -os nátrium-kloridot adunk, és alacsony hőmérsékleten forraljuk, amíg a só fel nem oldódik. A hűtött közegben a pH-t beállítjuk, szűrjük, öntjük és sterilizáljuk 20 percig 120 ° C-on.
Élesztővíz. 50-100 g száraz élesztőt 1 liter vízben keverünk, 10 percig forraljuk, szűrőpapíron átszűrjük és áramló gőzzel sterilezzük fél órán át három napig.
Élesztő autolizátum. 200 g 1 liter vízzel hígított préselt élesztőt, 2 g Na-t adunk hozzá2MSZH4, 1 n. NaOH-oldatot (pH = 6,1) és 5 ml kloroformot tartunk 37 ° C-on két napig, pH-ját 7,4-re állítjuk, 30 percig forraljuk, papírszűrőn átszűrjük, edényekbe öntjük és 115 ° C-on fél órán át sterilizáljuk.
Élesztőkivonat. 1 kg préselt élesztőt 1 liter vízzel hígítunk, az elegyet 1 órán át forraljuk, szűrőpapíron háromszor szűrjük és 115 ° C-on sterilizáljuk.
Vas-szulfit agar. Egy liter steril olvadt tápközegben 10 g glükózt adunk hozzá, amelyet feloldásra melegítünk, öntöttük fiolákba, amelyet autoklávozunk (112 ± 2) 12 perc alatt (alap tápközeg). 20% -os nátrium-szulfit-oldat2SO3 és 8% vas-szulfát-vas-FeSO-oldat4 vagy vas (III) klorid FeCl2 A felhasználást közvetlenül steril tartályban steril desztillált vízzel készítjük. A nátrium-szulfit-oldatot egészen feloldjuk. Az elemzés elvégzése előtt 5 ml 20% -os nátrium-szulfit-oldatot adunk 100 ml olvadt bázikus tápközeghez, összekeverjük, majd 1 ml 8% -os vas-szulfát-oldatot adunk hozzá, összekeverjük és sterilen öntöttük egy nagy oszlopon (12-15 cm) működő csövekbe. membránszűréssel vagy közvetlen vetéshez szükséges injekciós üvegben.
Nátrium-klorid izotóniás oldata. 1 liter desztillált vízhez 9 g nátrium-kloridot adunk. Az oldatot szűrjük, a pH-t beállítjuk, és szükség esetén 120 ° C-on 30 percig sterilizáljuk.
Burgonya-glükóz agar (CGA). 1 liter desztillált vízhez: g: burgonya - 400; glükóz - 20; agar - 20. A tápközeg elkészítése: 200 g hámozott burgonyát desztillált vízben forralunk. Ezután a kapott tápközeget sajttörlőn szűrjük, 20 g glükózt adunk hozzá, a pH-t a kívánt értékre állítjuk be és agarral keverjük. A tápközeget 2 literes lombikba öntjük, pamut-géz-dugóval vagy fóliával zárva, és 1,5 atm nyomáson autoklávozzuk. 30-40 percen belül.
Burgonya dextróz agar. 1 liter desztillált vízhez: g: burgonya - 200; dextróz - 20; agar - 20. A tápközeget ugyanúgy állítjuk elő, mint a burgonya-szacharóz agart, de szacharóz helyett dextrózt adunk hozzá.
Burgonya-szacharóz agar. 1 liter desztillált vízhez: g: burgonya - 200; szacharóz - 20; agar - 20. Közeg előkészítése: 200 g burgonyát forralunk, és a maradékot szűrjük át, 20 g szacharózt és 20 g agart adunk a húsleveshez, majd melegítés közben feloldjuk. Sterilizálás - autoklávban 30 percig. 1 atm.
Burgonya agar. 200 g hámozott és szeletekre vágott burgonyával mossuk 1 liter csapvizet, 30 percig forraljuk. A tápközeget ugyanúgy állítjuk elő, mint a burgonya-szacharóz agart, de szacharóz hozzáadása nélkül. A levest szűrjük át a pamuton és az eredeti térfogathoz igazítjuk. A kapott folyadékhoz 2% agart adunk, forraljuk addig, amíg fel nem oldódik, és semleges közeget (pH 7,0) hoz létre. A tápközeget 20 percen át 1 atm nyomáson sterilizáljuk.
Burgonya agar, libériai lilánnal. 1 liter desztillált vízhez 200 gramm burgonyát, hámozott és apróra vágott, 20 percig forralunk, a levest két gézrétegen szűrjük és a térfogatot az eredetire öntjük. 20 g agart adunk hozzá, megolvasztjuk, újra szűrjük, majd 3 ml 0,1% -os gén-lila oldatot adunk a tápközeghez.
Ammónium-keményítő-agar (KAA). A közeg szintetikus, szilárd, választható. 1 liter desztillált vízhez, g: keményítő - 10, (NH4)2SO4 - 2, K2MSZH4 - 1, MgSO4 - 1, CaCO3 - 3, agar - 20. Az agart 300 ml vízben oldjuk. Különösen oldjuk fel a keményítőt 100 ml vízben. A sókat a fennmaradó 600 ml vízben feloldjuk, forrásig melegítjük, és a keményítőt folyamatos keverés közben a forrásban lévő oldatba öntjük, majd vizet adunk hozzá agarral és autoklávban sterilizáljuk. Aktinomycetes termesztésére használják.
Laktóz-pepton környezet. 10 g peptont, 5 g nátrium-kloridot, 5 g laktózt 1 liter desztillált vízben való melegítéssel oldunk. Az összetevők feloldása után a pH-t 7,4-7,6-ra állítjuk be, 10 ml-re öntjük kémcsövekbe, sterilizáljuk (112 ± 2) 12 percen keresztül. Koncentrált laktóz-pepton tápközeg előállításához az összes összetevőt, kivéve a vizet, 10-szeresére növeljük, 1 ml-re öntjük kémcsövekbe és 10 ml-t injekciós üvegbe.
Laktóz-pepton táptalaj bróm-timollal. Laktóz-pepton-tápközegként 1 ml 1,6% -os 1,6% -os bróm-timol-kék oldat hozzáadásával és 3 ml-re ömlesztve, úszóval ellátott kémcsövekbe öntjük.
Laktóz-szacharóz környezet. Közepes Ressel-ként készült, de a glükóz helyett ugyanabban a mennyiségben vegye be a szacharózt.
Mannóz-szacharóz közeg. 1 liter 1,5% -os tápanyag-agaron, g: mannóz - 1; szacharóz - 10; vas-szulfát FeSO4 - 0,2; nátrium-hyposulfit Na2SO3· 5H2O - 0,08; nátrium-szulfit Na2SO3 - 0,4; 0,2% fenolvörös - 10. Az olvasztás után a tápközeg pH-ját 8,0-ra kell beállítani, 5-7 ml-es csövekbe kell adagolni, és 0,7 atm-on 15 percig sterilizálni kell. A sterilizálás utáni előkészített tápközeget oly módon nyerjük, hogy oszlopot és karkötőt kapjunk.
Hús pepton agar (MPA). Közepes mesterséges, szilárd, általános cél. Sűrű zselatin tömeg. Ezt a tápközeget széles körben alkalmazzák a laboratóriumi gyakorlatban a mikroorganizmusok termesztésére. Ezen tápközeg előállításához 1–20 g zúzott agart adunk hozzá 1 liter kész hús-peptonleveshez (sterilizálás előtt vagy után). Néhány órán át áztattuk az agar megduzzadásához, addig forraljuk fel alacsony hőmérsékleten, amíg teljesen fel nem oldódik. Ezután a folyadék térfogatát a kezdeti desztillált vízhez hozzuk, és a meleg vízzel korábban megnedvesített gézszűrőn keresztül szűrjük. Az MPA-t autokláv vagy Koch készülékben lehet főzni. A táptalajt forró üvegbe töltjük, és autoklávban 120 ° C-on 20 percig sterilizáljuk. A kész MPA-nak az olvadáspontja 96-100 ° és körülbelül 40 ° -os öntési pont, azaz szobahőmérsékleten mindig szilárd tápközeg. A fél-agar 0,4-0,5% agart tartalmaz. A levegő és a talaj mikroflóra kvantitatív elemzésére használják.
http://sredovarka.ucoz.com/publ/mikrobiologija/pitatelnye_sredy/pitatelnye_sredy_chast_1/15-1-0-27A tápközeget forraltuk, szűrtük, steril csövekben 5-7 ml-re öntöttük, és 0,5 atm nyomáson sterilizáltuk. 20 perc A sterilizálás utáni előkészített tápközeget oly módon nyerjük, hogy oszlopot és karkötőt kapjunk. Szerda könnyű.
A tápközeget 1,0-1,3% tápanyag-agaron állíthatjuk elő, megfelelő szénhidrátkoncentrációban és Andred indikátorban adva hozzá.
Ressel közegéhez készül, de a glükóz helyett ugyanolyan mennyiségben szacharózt szednek.
Először a szénhidrátokat feloldjuk olvadt tápközegben (pH 7,7 +/- 0,1), majd frissen készített vas- és nátrium-sóoldatokat adunk hozzá a tápközeg (hidrogén-szulfid indikátor) szerint. Ezenkívül fenol-vörös indikátort adunk a savképződés regisztrálásához. A tápközeget forraljuk, szűrjük, steril csövekben 5-7 ml-re öntjük, 20 percig sterilizáljuk. 0,5 atm nyomáson. és a Ressel környezete által kaszált; Az előkészített tápközeg pH-ja 7,3 ± 0,1; a szín piros.
Az olvadás után a tápközeg pH-ját 8,0-ra kell állítani, 5-7 ml-es csövekbe öntjük, és 0,7 atm-nál sterilizáljuk. 15 perc A sterilizálás utáni előkészített tápközeget oly módon nyerjük, hogy oszlopot és karkötőt kapjunk.
b) Az azonosítási környezetek.
100 ml 1% -os peptidvízhez (pH 7,3 +/– 0,1) nitrát nélkül 0,5-1,0% szükséges szénhidrát vagy alkohol (L-arabinóz, D-mannóz, D-szacharóz, D). - mannit, L-inozit, D-glükóz, oldható keményítő, stb.) és 1% Andrede indikátor, vagy 0,1 ml 1,6% bróm-timol-oldat. A tápközeget lebegő steril csövekbe öntjük és 0,5 atm nyomáson sterilizáljuk. 20 perc; az L-arabinóz közeget 20 percig sterilizálni kell. 0,1-0,2 atm. A Hiss-tápközeg előállításához csak a felsorolt szénhidrát-izomerek használhatók. Az Andréd indikátorral rendelkező kész Hiss médiumok világosak, és savas formájúvá válnak. A bromtimolovy kék zöld, füves árnyalattal rendelkező környezet, savas reakcióval - sárga, lúgos - kék.
Peptont, nátrium-kloridot és agar-agart adunk a vízhez. Az elegyet addig melegítjük, amíg az agar meg nem olvad, majd hozzáadunk kálium-foszfátot és glükózt, majd forraljuk 2-3 percig. Az elegyet 20% -os nátrium-hidroxid-oldattal meglúgosítjuk 7,4 ± 0,1 értékre, a tápközeg térfogatát az eredetire állítjuk, és 3 ml 1% -os bróm-timol-kék vizes oldatot adunk hozzá. Ezután a táptalajt pamutszűrőn szűrjük, steril csövekbe 4-5 ml-re öntjük és 0,5 atm nyomáson sterilizáljuk. 20 perc A sterilizálás előtt a közeg színe kék, az autoklávozás után pedig zöld-zöld, pH 7,1 +/- 0,1. Ha savas, a közeg sárgára változik.
Az összetevők keverékét addig melegítjük, amíg teljesen fel nem oldódik, majd szűrőpapíron szűrjük és 5 ml steril csövekbe öntjük. A levest 0,5 atm nyomáson sterilizáljuk. 20 perc
Szerda Kodama. 1% -os pepton vízben 0,5% -os oldható keményítőt adunk. A táptalajt steril csövekbe öntjük és 20 percig sterilizáljuk. 0,5 atm nyomás alatt. A keményítő hasítás eredményeinek értékeléséhez Lugol reagensét alkalmazzuk.
Szerda zselatinnal. A hús-pepton húsleveshez vagy Hottinger-húsleveshez 10,0-15,0 g / 100 ml-es finoman apróra vágott zselatint adunk (nyáron a zselatin koncentrációja 20% -ra emelkedik). A zselatint 30 percig hagyjuk megduzzadni. majd vízfürdőben lassú melegítéssel, 45,0 +/- 5,0 ° C-on feloldjuk. A pH-t 7,1 ± 0,1 értékre állítjuk be 10% -os nátrium-hidrogén-karbonát-oldat hozzáadásával az olvadt zselatinhoz. Lúgosabb reakcióval a zselatin rosszul fagy, és néha egyáltalán nem fagy. 1 liter oldott zselatinban két tojásfehérjét, amelyek kis mennyiségű desztillált vízzel felvertek, tisztázásra kerülnek. Az elegyet 20 percig keverjük és áramló gőzzel melegítjük. a fehérje teljes koagulációjáig és a közeg megvilágosodásához. Ezután a közeget forró állapotban szűrjük egy nagy felületű papír vagy pamut-gézszűrőn. Közepes, 5-8 ml-es csövekbe öntjük, 0,5 atm nyomáson sterilizáljuk. 20 perc Sterilizálás után a tápközeget lehűtjük, ha a csöveket hideg vízbe merítjük szigorúan álló helyzetben úgy, hogy az oszlop felső része teljesen lefagyjon a fagyasztás során.
Közeg a dekarboxilázok és az aminosav dihidrolázok meghatározására
A fenti tápközeg receptje szerint az összes összetevőt melegítéssel feloldjuk, a pH-t 6,4 ± 0,1 értékre állítjuk be, majd hozzáadjuk a megfelelő indikátort, és a közeget 4 egyenlő részre osztjuk. Az aminosav egy részét nem adjuk hozzá, ez a rész kontrollként szolgál. A fennmaradó részekben a következőket állítjuk elő: az első - 1% lizinben, a második - 1% -os ornitinban, a harmadik - 1% argininben. Aminosavaknak L-formában kell lenniük, ha vannak D-aminosavak, akkor 2% -ot adunk hozzá, mert a mikroorganizmusok csak L-formák ellen hatnak. Aminosavak hozzáadása után a sterilizálás előtt szükség esetén a közeg reakcióját 0,1% -os sósavoldattal korrigáljuk. A közeget 1-2 ml-re öntjük kémiailag tiszta steril csövekben, és 0,1-0,2 atm nyomáson sterilizáljuk. 20 perc Egy kis mennyiségű flokkuláció a médiában nem számít. A pepton-élesztő táptalajon zöld-zöld színű, savas reakcióval a közeg sárgára változik, lúgos - kék színűvé válik.
Hús-pepton-húsleves: 1% -os száraz peptonnal és 0,85% -os sóval. Az elegyet addig forraljuk, amíg a pepton és a só teljesen fel nem oldódik, a kívánt reakcióközeget 0,7 atm nyomáson sterilizáljuk. 20 perc
a) Az indol képződésének meghatározása
Az aldehidet alkoholban oldjuk, majd savat adunk hozzá, keverjük, sötét helyen tároljuk.
A szűrt papírcsíkokat oxálsav telített oldatával impregnáljuk és termosztátban szárítjuk.
b) A hidrogén-szulfid képződésének kimutatása
A szűrőpapír csíkokat ecetsav-oldattal impregnáljuk. Szárított a levegőben.
Az indol és hidrogén-szulfid indikátorpapír csíkjait a vizsgálati cső dugója alá helyezzük a beoltott tenyészettel. Ha az indol képződik, a szalag vörös színűvé válik, és ha hidrogén-szulfid alakul ki, a szalag feketére változik.
c) A nitrát reduktáz meghatározásához
Készítsünk külön két oldatot. Az első azáltal, hogy porcelánhabarcsban való melegítéssel 20 ml desztillált vízben 0,2 mg alfa-naftil-amint (C10H7NH2) oldunk. A folyadékot óvatosan 150 ml 12% -os ecetsav-oldatba öntjük. A második - 0,5 g szulfanilsavat (C6H4NH2S03H) feloldjuk 150 ml 12% -os ecetsavban.
Ezután mindkét oldatot egy jól lebegő dugóval ellátott sötét lombikba öntjük. Gryss reagensének színtelennek kell lennie, ha rózsaszínre változik, akkor nem használják fel.
A Griess-reagens előállításának összetettsége, összetevőinek (különösen az alfa-naftil-amin) szűkössége és toxicitása korlátozza alkalmazhatóságát. Ezek a hátrányok hiányoznak a rivanol reagens alkalmazásával, amely egyenlő térfogatú 0,1% -os rivanol oldat desztillált vízben és 12% -os sósavoldat keveréke. Pozitív reakció esetén a táptalajon vagy az 1% -os peptidvízben 0,1% KNO3-ban termelt törzs tenyészete pirosra vált.
d) A béta-galaktozidáz aktivitás meghatározásához állítsuk elő az orto-nitrafenil-béta-D-galaktopiranozid (ONFG) M / 75 oldatát:
37 ° C-on desztillált vízben oldva. C ONFG, majd nátrium-foszfát (NaH2PO4 x H2O) oldatát adjuk, amely monoszubsztituált. A pH-t 7,0-ra állítjuk. Az oldatot színtelen - -4 fokon kell tárolni. C. Használat előtt az oldatot néhány percig inkubáljuk, amíg a foszfát feloldódik, ami a hidegben kristályosodik.
7.3. Tartósítószerek
a) Bórsavval tartósítószer
Sterilizált vízfürdőben vagy 100 fokos gőzzel. C - 20 perc. 3 napon belül.
Kombináljon 100 ml defibrinált ramvért 15 ml bórsavval.
b) Alsevera tartósítószer
Vízfürdőben sterilizálva vagy 100 fokos hőmérsékleten áramló gőzzel. C 20 percig 3 napon belül.
Az Alsevera konzerváló és defibrinált vér egyenlően oszlik meg. A konzervált vér hőmérséklete (4 +/- 1) fok. C.
7.4. A tápközeg minőségellenőrzésének eljárása
A kolera diagnosztizálásához használt tápközegek, tartósítószerek, idegen mikroflóra inhibitorok a jelenlegi oktatási és módszertani dokumentumoknak megfelelően kötelező tesztelés tárgyát képezik.
A szilárd és folyékony tápközegek bakteriológiai minőségellenőrzését pestisellenes laboratóriumok és más intézmények végezhetik, amelyek engedélyezik a kolera kórokozóval való munkát, a Vibrio cholerae Pl (145) és a Vibrio cholerae M-878 tesztelésére szolgáló törzseket, valamint különösen veszélyes fertőzésekre szolgáló laboratóriumokat. az állami egészségügyi és járványügyi felügyeletet végző intézmények, az avirulens cholera vibrio nem O1 szerocsoport P-9741-es vizsgálati törzsét felhasználva a gödörök ellenőrzésére vonatkozó jelenlegi iránymutatásokban meghatározott sorrendben atelnyh médiában.
Bakteriológiai ellenőrzésnek vetik alá a száraz gyártási környezet minden egyes sorozatát, amely az állami nyilvántartási számmal rendelkezik, a gyártási engedélyt és a megfelelő lejárati dátumot, valamint a laboratóriumi termelési környezetet.
A kutatásra szánt közeg teljes térfogatának egy részét 200 ml agar mennyiségben és 100 ml ipari termelésű pepton alapvető oldatának és 100 ml-es mennyiségének laboratóriumi termeléshez viszonyított mennyiségére küldjük. Az iránynak jeleznie kell a közeg nevét, a gyártót, a kötegszámot és a száraz közeg lejárati idejét, a szabályozott főzés időpontját. A szállított mintákat biztonságosan kell csomagolni, a folyékony közeggel ellátott fiolákat gumi dugóval zárják.
A tápközeg optimális vizsgálati ideje 10-14 nappal az elkészítés után.
Ha egy teszt pozitív, akkor a megfelelő szárazanyag-adag használható. A médiumok sorozatának későbbi ellenőrzése évente történik, valamint akkor is, amikor a száraz közeg előkészítésének feltételei az előző vizsgálat időpontjától függetlenül változnak.
Ha az első ellenőrzés során a környezet nem megfelelőnek bizonyult, ugyanazt a száraz táptalajt kell ismételten bakteriológiai ellenőrzésnek alávetni, míg egy új főzési mintát és egy ugyanolyan sorozat száraz közegének mintát kell küldeni az ellenőrzéshez.
A helyszínen előkészített táptalaj újbóli ellenőrzésének negatív eredményét kapva, és a megfigyelőintézet laboratóriumában elkészített ugyanolyan szárazanyag-sorozat mintájának pozitív bakteriológiai ellenőrzésével ezt a száraz tápközeg-sorozatot megfelelőnek kell tekinteni, és intézkedéseket kell tenni a helyi gyártási technológia hibájának tisztázására és megszüntetésére.
A negatív eredmény kézhezvételét követően a sorozat száraz közegének mintájára panasz érkezik a gyártó címére és a GISC nevére. Tarasevich L. A.
A lúgos agar és a peptontermelés felszabadulásának alapoldata (száraz tápközeg és az abból készült minták) a gyártó közleményében a tápközeg használatára vonatkoznak.
Laboratóriumi gyártási környezetben a következő tárolási időszakokat határozzák meg:
- lúgos agar esetében - a gyártás időpontjától számított 6 hónap és az elsődleges ellenőrzés után - ezen időszak lejárta után további 3 hónapos időtartam alatt újra szabályozható és meghosszabbítható az eltarthatósági idő;
- bázikus peptonoldat esetében - 2 év a tápközeg minőségellenőrzésével az elkészítés után, majd 1,0-1,5 év elteltével.
A lezárt csomagolású 1% -os peptonvíz (gumi dugók és fém kupakok) eltarthatósága 2 hónap, és az újbóli ellenőrzés után egy hónapig meghosszabbítható az eltarthatósági idő.
A felhasználásra kész tápközegeket sötét hűvös helyen tároljuk (6-20 ° C), elkerülve az 5 foknál nagyobb hőmérsékletkülönbséget. C. A hőmérséklet emelkedése és csökkenése káros hatással van a közeg biológiai tulajdonságaira.
A lúgos agar és a fő pepton, amelyet egy avirulens cholera vibrio teszt szabályoz, a területi laboratóriumok és a pestisellenes intézmények koordinációjával rendszeresen újra ellenőrzik, az utóbbi alapján virulens vizsgálati törzsekkel. A kálium-telluritot a területi anti-pestis intézményben is évente ellenőriznek.
8. A szerológiai diagnosztika módszerei
A kutatás szerológiai módszerei általában többletértékkel bírnak, és csak bizonyos esetekben, ha operatív és retrospektív epidemiológiai elemzést végeznek, azok eredményei meghatározóak lehetnek.
A kolera szerológiai diagnosztizálására immunológiai reakciókat alkalmaznak, amelyek a betegek és a vibrio-hordozók, valamint a vakcinázott specifikus antitestek vérszérumában mutatkoznak meg: agglutininek, antitoxinok és vibriocid antitestek.
A betegség kezdetétől számított 5-7. Napon a kolerában szenvedő betegek agglutinineket, vibriocid antitesteket és antitoxinokat mutatnak.
Ajánlatos a párosított szérumokat 7-10 napos intervallummal vizsgálni. Az első tesztet az 5-7. Napon kell elvégezni azonnali diagnózishoz, a második - 7-10 napos vagy annál későbbi - retrospektív célokra.
Vér a vénából vett szerológiai vizsgálatokhoz, és ilyen lehetőség hiányában - az ujjától. A vénából 1-5 ml vért veszünk, a véralvadást követően a vérrög steril üvegrúddal vagy platinahurokkal hámozódik le a cső faláról. A csöveket hűtőszekrényben tárolják és a laboratóriumba hűtik (termosz, hűtőzsák stb.). A laboratóriumban a szérumot (56,0 ± 0,5) fokon inaktiváljuk. C 30 perc.
Ha a reakció napján vér gyűlik össze, a koagulált vércsöveket 10-15 percig kell centrifugálni. 3000 fordulat / percnél Ha nincs lehetőség arra, hogy a szérumot azonnal megvizsgáljuk, az ampullákban tárolják (4,0 +/- 0,5) fok. C. Az ujjból származó vért 0,4 ml térfogatban veszik fel, és steril penicillin injekciós üvegbe vagy csőbe helyezzük 1,6 ml 0,9% -os nátrium-klorid-oldattal (1: 5).
8.1. Az agglutininek meghatározása szérumban
A. A kolera antitestek kimutatása kiterjesztett agglutinációs reakció módszerével. A vizsgálati szérumot 1% 1: 10-től 1: 640-ig terjedő térfogatban 1% -os peptidvízzel hígítjuk. Antigénként ebben a helyszínen izolált 3 órás táptalajkultúrát alkalmaznak, vagy 3 sorban vizsgáljuk Vibrio cholerae (Ogawa szerovárok, Inaba szerogramok és O139 szerocsoportok) tenyészeteivel. Tegyünk egy csepp tenyészet-antigént egy kémcsőbe tenyésztett szérummal, és tegyük 1 óra alatt egy termosztátba, majd reggelig hűtőszekrényben, hőmérsékleten (4,0 +/- 0,5). C, majd jegyezze fel az eredményeket. A reakciót az antigén és a szérum kontrolljai kísérik.
A reakció titerének meghatározásakor vegye figyelembe a 3-4 kereszt agglutinációval végzett hígítást.
A páciens szérumának vizsgálata az agglutinációs reakció során 1:40 és annál nagyobb hígításnál megközelítőleg pozitívnak tekinthető.
A diagnosztikai érték nem kevesebb, mint az ellenanyag-titerek 4-szeresének növekedése.
B. A közvetett hemagglutináció (RNGA) reakciója a diagnosztikus eritrocita kolera antigénnel
A teljes ellenanyagok kimutatására a szérumban phaa-t szántak. Ez egy meglehetősen specifikus és érzékeny kétkomponensű reakció. Az érzékenység messze meghaladja az agglutináció reakcióját. A szükséges összetevőket, a makro- és mikrotérfogat-meghatározási módszert az eritrocitás kolera antigén diagnosztikai kézikönyv tartalmazza.
A páciens szérumának 1:40 és annál nagyobb hígítású vizsgálatának eredménye pozitívnak tekinthető.
A diagnosztikai érték nem kevesebb, mint az ellenanyag-titerek 4-szeresének növekedése.
B. Antigén semlegesítési reakció (RNSg)
Az antitestek kimutatására a szérumban diagnosztikus eritrocita kolera immunoglobulin szolgál RNS-t. Az antigén semlegesítési reakciója rendkívül specifikus háromkomponensű reakció. Ennek elve a hozzáadott antigén specifikus semlegesítése mind a teljes, mind a hiányos antitestekkel, amelyek másoknál korábban jelennek meg. A szükséges összetevőket, a makro- és mikrotérfogat-meghatározási módszert az eritrocita-kolera immunoglobulin diagnosztizálására vonatkozó útmutató tartalmazza.
A PHAA és a PHAg reakciórendszerének alkalmazásakor nincs szükség specifikus kontroll beállítására minden vizsgált szérummal, mivel ezek a két reakció kölcsönösen ellenőrzik az eredményeket.
A beteg szérumának RNSg-ben végzett 1:50 (1:80) és annál nagyobb hígítású vizsgálatának eredménye pozitívnak tekinthető.
Az RNSA és a PHAg párosított szérumainak vizsgálatában az antitest-titerek legalább 4-szeres növekedése diagnosztikus jelentőséggel bír.
8.2. A vibriocid antitestek meghatározása. T
szérum (PBA)
Ha egy szerovár cholera okozta járvány okozta kitörés során szerológiai vizsgálatokat végeznek, a megfelelő szerovár egyik törzsét használjuk a reakcióban, ezek hiányában mindkét szerovár két törzse.
Anyagok és berendezések
- 30 percig melegítéssel inaktivált vizsgálati szérumokat. hőmérsékleten (56,0 ± 0,5). C;
- száraz komplement vagy frissen nyert tengerimalac szérum 1:20 hígítással;
- 0,9% nátrium-klorid-oldat pH = 7,2 +/- 0,1;
- a Vibrio cholerae Ogawa és az Inaba szerovárok törzsek, amelyek az S-formában tipikusak, nem érzékenyek a komplementre;
- Petri-csészék lúgos agarral;
- termosztát (37,0 ± 1,0) fokon. C.
A reakció beállítása
A következő kontrollok szükségesek: a) komplement-szabályozás (0,9 ml komplement és 0,1 ml tenyészet); b) szérum kontroll (0,8 ml 0,9% -os nátrium-klorid-oldat, 0,1 ml szérum és 0,1 ml tenyészet); c) tenyészet-kontroll (0,9 ml 0,9% -os nátrium-klorid-oldat és 0,1 ml tenyészet).
A vizsgálati csövekkel ellátott állvány 1 órán át vízfürdőbe vagy termosztátba (37,0 ± 0,5) fokos hőmérsékleten van elhelyezve. C, tenyésztés-ellenőrző cső előzetes vetését két lúgos agar lemezre, hogy meghatározzuk az élő vibriók koncentrációját a vizsgálati szuszpenzióban (a hígítás szabályozása).
1 óra elteltével az állványt ismét jégre helyezzük, és minden egyes csőből egy külön steril pipettával 0,1 ml tenyészetet adunk egy 7,0 ± 0,1 pH-jú lúgos agarlemezre. A vetés egyenletesen oszlik el a csésze felületén, hintával vagy spatulával. A csészéket 18-24 órán át termosztátban helyezzük 37,0 ± 0,5 fokos hőmérsékleten. C, majd számolja meg a termesztett telepek számát.
A tenyészetekben a kontroll csövekből származó növényekben a telepek számának növekednie kell, közel a tenyésztés ellenőrzéséhez.
A Vibriocid titeret a maximális szérumhígításnak tekintjük, amely nem kevesebb, mint 50% -a kolera vibrio sejtek halálát okozza, amit a Petri-csészékben lévő agarlemezekbe történő beoltáskor detektálnak, mint a komplement kontroll csőből származó termesztett telepek számához képest.
A vibriocid antitestek (BA) meghatározása szénhidrát fermentáción alapuló szérumban
A BA távollétét vagy jelenlétét a szacharóz fermentációja alapján határozzák meg, amelyet egy indikátor segítségével rögzítenek.
Anyagok és berendezések:
- inaktivált szérum;
- a Vibrio cholerae serovar Ogawa és Inaba törzsek;
- 1: 1 arányban hígított komplement 1% 1% -os szacharózt és 1% Andred-t tartalmazó peptonvízzel;
- termosztát (37,0 ± 1) fokon. C.
A reakció beállítása
A reakció összetételét az alábbi ellenőrzések kísérik:
- 0,45 ml 1% -os 1% -os szacharózt tartalmazó 1% -os peptonvizet és 1% Andreda + 0,05 ml vizsgálati szérumot + 0,45 ml tenyészet szuszpenziót - szérum kontroll;
- 0,45 ml komplement szacharózzal és indikátorral + 0,45 ml tenyészet - komplement kontroll;
- 0,45 ml 1% -os peptonvíz szacharózzal és indikátorral + 0,45 ml tenyészet - tenyészet kontroll;
- 0,45 ml 1% -os peptonvíz szacharózzal és egy indikátor + 0,05 ml vizsgálati szérum - a szérum sterilitásának ellenőrzése.
5-6 óra múlva figyelembe veszik a reakciót. Ugyanakkor a kontrollban (kivéve a szérum sterilitásának szabályozását) a csövek tartalma piros vagy rózsaszín színű lesz. Az indikátor színváltozása a munkasor kémcsövében, amely a szacharóz fermentációjával többszörözött vibriókkal társult, a vibriocid antitestek hiányát jelzi a vizsgált szérumban. A szérum legnagyobb hígítását vibriocid titernek tekintjük, amelyben a csövek tartalma változatlan marad, vagy intenzitása jelentősen eltér a kontroll minták színétől. Az eredményt a szérum hígítás decimális logaritmusaként fejezzük ki, ellenkező jelzéssel.
8.3. A toxin-semlegesítő antitestek meghatározása
szérumban
A toxin-semlegesítő antitestek kiméra a kolera és a vibrációs hordozók szérumában egy PHA-t alkalmaznak eritrocita kolera enterotoxikus diagnosztikával (ECED), amelyben a fertőzést O1 és O133 kolerák okozzák. A toxin-semlegesítő antitestek a betegség 5-7. Napján jelennek meg, elérve a maximumot a 14-21. Napon, majd a titer fokozatosan csökken, de hosszabb ideig tart, mint más antitestek. A vibriocid és más specifikus kolera antitestekkel összehasonlítva a kolera toxin elleni immunglobulinok a fertőzés után hosszabb ideig keringenek a szérumban (akár 8-10 hónapos vagy annál idősebb). A PHA feltételes pozitív titerét az ECED-vel 1: 160 és annál magasabbnak kell tekinteni. Ajánlatos a párosított szérum vizsgálata.
Az RNS és az ECAD eredménye lehetővé teszi a fókuszban keringő kolera vibrio törzs toxigénicitását (járvány), többek között a tenyészet izolálása nélkül.
http://rudoctor.net/medicine2009/bz-tw/med-ymsez/pg-5.htm4.2. ELLENŐRZÉSI MÓDSZEREK. BIOLÓGIAI ÉS MIKROBIOLÓGIAI TÉNYEZŐK
A kolera laboratóriumi diagnózisa
Bevezetés Dátum 2007-08-01
1. FEJLESZTETT: a Fogyasztói Jogok Védelmi és Emberi Jóléti Felügyeleti Szövetsége (Yu.M. Fedorov, N.Ya. Zhilina); Szövetségi Állami Egészségügyi Intézet "Rostov-on-Don Kutatási Anti-Pestis Intézet" (Yu.M. Lomov, B. N. Mishankin, L.S. Podosinnikova, L. G. Voronezhskaya, I.Ya.Cherepakhina, T.A. Kudryakova, B.L.Mazrukho, L.M.Smolikova, I.V. Ryzhko, R.I. Tzuraeva, E.A.Moskvitina, B.P.Golubev, S.O.Vodopyanov, E.O.Vodopyanov, E.V. V.D.Kruglikov, N.R.Telesmanich, A.B. Mazrukho V. V. Agafonova); Szövetségi Állami Egészségügyi Intézet "Pestisellenes Központ" (A. A. Kureregian, S. M. Ivanova, Yu.S. Korolev); Szövetségi Állami Egészségügyi Intézet "Orosz Kutatóellenes Intézet" Mikrobi "(A.K. Adamov, Z. V. Malykhina, T.V. Bugorkova, N. I. Smirnova, L.F.Livanova; A.V.Toporkov S. S. Zadnova, N. A. Osin, E.S. Kazakova, N.B.Cheldysheva, A.V.Osin); az Irkutszki Anti-Pestis Kutatóintézet szövetségi állami egészségügyi intézménye (A.S.Maramovich V. Ganin V., Urbanovich L., V. Pogorelov V., L. V. Mironova, E.S.Kulikalova); pestisellenes kutatóintézet "(V.N.Saveliev); Szövetségi Állami Egészségügyi Intézet" Fekete-tengeri Anti-Pestis Állomás "(G.V. Galtsev), Állami Antibiotikum Központ (S. V. Sidorenko), orosz Orvostudományi Akadémia posztgraduális képzés (E.A.Vedmina), LIS Tarasevich GISK (T. Anisimova, L.V.Sayapina).
2. JÓVÁHAGYOTT a Fogyasztói Jogok Védelmi és Emberi Jóléti Felügyeleti Szolgálatának vezetője, az Orosz Föderáció Állami Egészségügyi Orvosa GG Onishchenko 2007. május 31.
3. A METOLÓGIAI UTASÍTÁSOK BEVEZETÉSE "A kolera laboratóriumi diagnózisa" MU 4.2.1097-02.
1. Hatály
1.1. A "A kolera laboratóriumi diagnózisa" iránymutatások célja a meglévő szabályozási dokumentumok végrehajtása és alkalmazása, amelyek meghatározzák a kolera epidemiológiai felügyeletére vonatkozó követelményeket a kolera laboratóriumi diagnózisának szervezése és lefolytatása tekintetében.
1.2. Ezek az iránymutatások olyan intézmények bakteriológiai laboratóriumainak szakemberei számára készültek, akik állami egészségügyi és járványügyi felügyeletet, orvosi és megelőző és pestisellenes intézményeket végeznek.
2.5. Egészségügyi szabályok "Az orvosi immunobiológiai készítmények szállítására és tárolására vonatkozó feltételek. SP 3.3.2.028-95".
A kolera akut fertőző betegség, hasmenéses szindrómával, a fertőzés széklet-orális mechanizmusával, az élelmiszerrel, a vízzel és a kórokozó elterjedésének útján. A fertőzések egy csoportjába tartozik, amelyet a Nemzetközi Egészségügyi Szabályzat (2005) szabályoz.
A kolera okozó ágensei a kolera vibrios O1 (klasszikus és Eltor biovars) és az O139 szerocsoportok.
Mindkét szerocsoport toxikus () kolera vibriója cholera-betegséget okoz, amely hajlamos a járvány és a járványos terjedésre (járványosan jelentős törzsek), nem toxikus () - egy- vagy csoportos kolera-betegségekre, amelyek egy közös fertőzési forrással rendelkeznek.
A Vibrio cholerae nem toxigén () törzseiben az egyes patogén gének jelenléte lehetséges, amelyek közül az adhéziós folyamat megvalósításában részt vevő génnek bizonyos jelentősége van.
Az izolált kolera vibriók genomjának biológiai módszerekkel jellemezhető jellemzőit széles körben alkalmazzák az izolált törzsek epidemiológiai vizsgálatának és epidemiológiai jelentőségének értékelésére.
A kolera szabályozott mennyiségű diagnosztikai vizsgálata elvégezhető:
- olyan intézmények bakteriológiai laboratóriumai, amelyek állami egészségügyi és járványügyi felügyeleti, kezelési és megelőzési és pestisellenes intézményeket végeznek, amelyek engedélyezik a III.
- a Rospotrebnadzor higiéniai és epidemiológiai központjainak különösen veszélyes fertőzéseinek laboratóriumai és a kolera diagnosztikai vizsgálatára jogosult osztályok;
- pestisellenes intézmények laboratóriumai, amelyeknek engedélye van a kolera diagnosztikai vizsgálatának elvégzésére és a kolerát okozó szerrel való együttműködésre.
A laboratóriumokban a kolera diagnosztikai tanulmányainak megszervezését és végrehajtását a következő előírásoknak megfelelően kell elvégezni: t
- a III-IV. csoportba tartozó patogén mikroorganizmusokkal végzett munka biztonsága - állami egészségügyi és járványügyi felügyeletet végző intézmények bakteriológiai laboratóriumai és egészségügyi intézmények;
- a Rospotrebnadzor higiéniai és epidemiológiai központjainak különösen veszélyes fertőzéseinek laboratóriumait (osztályokat) kezelő laboratóriumok (osztályok) biztonsága a Rospotrebnadzor-i laboratóriumok (osztályok) számára;
- a IV. kórokozó mikroorganizmusok nyilvántartásba vételének, tárolásának, továbbításának és szállításának sorrendje.
A laboratóriumok számára a kolerák diagnosztikai vizsgálatára vonatkozó engedélyek megszerzésére vonatkozó eljárást az engedélyek kiadási eljárására vonatkozó jelenlegi szabályozási dokumentumok határozzák meg.
Az epidemiológiai helyzet komplikációjának körülményei között a járványgyógyászati személyzet döntése az ideiglenes engedély a kolerára vonatkozó diagnosztikai vizsgálatok elvégzésére az állami egészségügyi és járványügyi felügyeletet végrehajtó intézmények bakteriológiai laboratóriumaira, és a járvány laboratóriumi szolgálatának részeként működő egyéb intézmények.
4.1.1. Az állami egészségügyi és járványügyi felügyeletet végző intézmények bakteriológiai laboratóriumai, valamint az orvosi és megelőző intézmények rutinszerű diagnosztikai vizsgálatokat végeznek az akut bélfertőzésben szenvedő betegek anyagának kolerájáról, az egészséges személyek bizonyos kontingenséről és a környezeti tárgyakból származó mintákról a jelenlegi epidemiológiai felügyeleti előírásokban előírt mennyiségben. kolera.
A vizsgálatokat az analízis negatív eredményének megállapítása előtt vagy az agar és a polikarbonát médiumokhoz tartozó vibriókra jellemző növekedés izolálásával és az oxidázzal szemben pozitív reakcióval végezzük. A tenyészeteket tisztasággal vizsgáljuk kenetben, Gram-festéssel, mobilitás és az üveg agglutinációs reakciójával (a továbbiakban csúszási agglutináció) koler O1, Ogawa, Inaba, PO és O139 szérumokkal.
Pozitív eredménnyel a csúszdagglutinációt azonnal jelentik a Rospotrebnadzor hatóságoknak az Orosz Föderáció témájában, a végső azonosítás kultúráját az előírt módon azonnal egy speciális laboratóriumba szállítják.
Ha negatív, csúszási agglutináció:
- Az emberekből izolált O1 és O139 kultúrák nem-glutináló kolera szérumát egy további laboratóriumba továbbítják.
- A környezetvédelmi objektumokból izolált O1 és O139 kultúrák nem -glutináló kolera-szérumait a helyszínen azonosítják, vagy - amennyiben megállapodtak - átadják a Rospotrebnadzor intézménynek.
- 4.1.2. A Rospotrebnadzor higiéniai és epidemiológiai központjainak különösen veszélyes fertőzéseinek laboratóriumai:
- diagnosztizálják a beteg és a halott anyagból gyanús kolerával és környezetvédelmi tárgyakból származó mintákat;
- azonosítsa a területi és megyei laboratóriumokban izolált vibriók kultúráit, meghatározva a taxonómiai azonosságukat, és meghatározza a cholerae O1 és O139 szerocsoport epidemiás jelentőségét (toxigénicitását) és antibiotikum érzékenységét az e laboratóriumok számára előírt vizsgálatok szerint;
- a területi laboratóriumokban használt tápközegek és más diagnosztikai termékek bakteriológiai minőségellenőrzésének elvégzése (vagy megszervezése);
- operatív információt szolgáltatnak a szerocsoport kolera vibrio O1 és O139 izolálásáról;
- az előírt módon a tenyésztett kolera vibrio-kultúrákat azonnal átviszi a területi pestisellenes intézménynek, amelynek taxonómiai vagy toxicitási tulajdonságait nem a rendelkezésre álló diagnosztikai eszközök határozzák meg;
- az azonosítástól számított 5 napon belül a pestisellenes kutatóintézet az O1, O139 kolera vibriók összes kultúráját irányítja, függetlenül a vizsgálat tárgyától, és más szerocsoportok átkerülnek a területi pestisellenes intézménynek vagy a Cholera Rostov-on-Don probléma vezetőjének; ;
- ellenőrzik a területi laboratóriumok tevékenységét, módszertani segítséget nyújtanak számukra a kolera epidemiológiai felügyelet laboratóriumi támogatásának minden területén.
4.1.3. Anti-Plague Laboratories:
- a betegek és elhunyt anyagok gyanús kolerával történő kutatását, valamint környezetvédelmi tárgyakból származó mintákat végez;
- erősítse meg a felügyelt területen izolált Vibrio cholerae tenyészetének taxonómiai azonosságát;
- azonosítsa a Vibrio cholerae összes atípusos kultúráját a szerológiai, biokémiai és egyéb azonosítási módok további módszereivel a taxonómiai identitás tisztázása érdekében;
- meghatározza a tenyészetek járványos jelentőségét (toxigénicitását) és antibiotikum érzékenységét;
- módszertani útmutatást ad a kolera epidemiológiai felügyelet laboratóriumi támogatásának valamennyi kérdésére a felügyelt területen;
- A megalapozott rendben az útlevéllel rendelkező vibrio cholerae kiválasztott kultúrái átkerülnek a Rostov-on-Don probléma vezető pestisellenes intézetébe, és ugyanakkor az azonos kultúrákhoz tartozó útlevelek a Rospotrebnadzor anti-pestis központjába kerülnek.
A kolera felügyelet laboratóriumi támogatása a jelenlegi szabályozási és módszertani dokumentumok szerint történik. A kolera megelőző vizsgálata a munkanapon megfelelő tápközeg használatával történik, a kolerával (holttestekkel) gyanús betegek anyagának diagnosztikai vizsgálata az éjjeli laboratóriumi körülmények között.
A laboratóriumok szervezése és szabályozása, valamint a kolera-fókuszban lévő laboratóriumi szolgáltatások kialakítása a kolera-ellenes események szervezéséről és vezetéséről szóló jelenlegi szabályozási dokumentumoknak megfelelően történik.
Az anti-kolera-intézkedések rendszerében a bakteriológiai elemzés jelentős helyet foglal el, a megelőző és járványellenes intézkedések jellege és terjedelme függ annak pontosságától és időszerűségétől.
Kutatás, amelynek célja:
- azonosítsa a kolera és vibrio hordozóval rendelkező betegeket;
- a kolerával gyanús betegségben halt személyek végleges diagnózisának megállapítása;
- a kolera etiotropikus kezelésének megválasztása;
- a kolera és a rezgéscsillapító betegek kezelésének hatékonyságának bakteriológiai ellenőrzése;
- a környezeti tárgyak bakteriológiai ellenőrzése, beleértve a felszíni víztesteket is;
- a fertőzés fókuszában lévő fertőtlenítés hatékonyságának bakteriológiai ellenőrzése.
A bakteriológiai elemzés anyagai lehetnek széklet, hányás, epe, kadaverikus anyag (a vékonybél és az epehólyag szegmensei); széklet által szennyezett tárgyak (ágy és alsóneműk stb.); víz, iszap, hidrobionok, szennyvíz, szennyvízcsatornák tartalma; mosás környezeti tárgyakból, élelmiszertermékekből, legyekből stb.
A betegből származó anyagot az orvosi intézmény személyzete azonnal eltávolítja a beteg azonosítását követően és az antibiotikumokkal történő kezelés megkezdése előtt. A felügyelő felelős a minták megfelelő kiválasztásáért, tárolásáért és időben történő szállításáért a laboratóriumba.
Figyelembe kell venni a Vibrio cholerae nagyfokú érzékenységét a fertőtlenítőszerekre és a savakra, az egyidejű mikroflóra antagonista hatásának lehetőségét és a kórokozó várható koncentrációját a vizsgált anyagban. Ha a kolera algid formájú betegek anyagában a kórokozó koncentrációja eléri a 10-10 mc / ml-t, akkor az enyhe formájú betegek székletében, antibiotikumokkal, regenerálódókkal és hordozókkal kezelve, a kolera vibriók száma általában nem haladja meg a 10-10 mc / g-ot.
A mintavételhez tiszta, steril edényeket használjon, amelyek nem tartalmaznak nyomokat fertőtlenítő oldatokból. Az edények és más anyaggyűjtő eszközök sterilizálása autoklávozással, száraz hővel vagy 2% -os szódabikarbonsavban forralva történik.
A vizsgálathoz szükséges anyagot legkésőbb 2 órával a felvétel után kell kézbesíteni. A szállítási közeg szállítási idejének meghosszabbítása esetén. A legmegfelelőbb és leghatékonyabb hatású az 1% -os peptonvíz (pH 8,4 ± 0,1).
A kálium-tellurit 1: 100000-1: 200000 vagy Progress mosószer 0,1-0,2% koncentrációban adható a peptonvízhez, mint egyidejű flóra gátlója. Bizonyos esetekben a sótartalmú szerek felhasználhatók az anyag szállítására (lásd 7. fejezet).
A peptonvízzel ellátott palackokon (kémcsövek), amelyeket kórházakba vittek mintavétel céljából, fel kell tüntetni egy címkét vagy egy feliratot, amely tartalmazza a közeg nevét és az elkészítés időpontját.
Javasoljuk, hogy a tápközeget tartályokban vagy kémcsövekben, legfeljebb 2 napig lezárva, 10,0 ± 0,2 ° C-nál magasabb hőmérsékleten tárolja, feltéve, hogy sterilek maradnak. Javasoljuk, hogy a kórházakat és a mintavételi csoportokat a hengerelt flakonokban lévő médiával biztosítsák.
Ha a betegnek hasmenése van, az anyagot az etiotrop terápia megkezdése előtt 10-20 ml mennyiségben veszik fel, enyhe formájú betegeknél - 1-2 g széklet. Súlyos formájú betegeknél az anyagot a laboratóriumba juttatják natív és 1% -os pepton vízben. A hordozóközegbe 5-6 ml tápközegre 1-2 ml vagy 1-2 g anyagot vezetünk be.
Az anyagnak a laboratóriumba történő szállításának idejére (hosszú úszás, körutazás, stb.) Kényszerített meghosszabbítással szűrőpapír csíkot használhat. A folyékony széklet a szokásos vastag papírból vagy más higroszkópos anyagból készült csíkot impregnálja és műanyag zacskóban lezárja, hogy megakadályozza a kiszáradást a laboratóriumba történő szállítás során. Ilyen csíkokon a kolera vibriók akár négy-öt hétig is fennmaradnak, amíg a nedvesség megmarad.
A vibrio-hordozóanyag vizsgálata során az orvosi és megelőző intézmények orvosi személyzete veszi át az anyagot, a járvány idején speciális mintavételi csapatokat hoznak létre, akik epidemiológusok irányítása alatt dolgoznak.
1-2 g mennyiségű anyagot szállíthatunk a vizsgálathoz natív, 1% -os peptonvízben vagy más hordozóközegben.
5.1.1. A kolera, a vibrio-hordozók és a velük érintkező személyek mintavételi módszerei, szekcionált anyag
10-20 ml ürüléket és hányást steril edényekbe gyűjtünk, steril kanálokkal vagy üvegcsövekkel, egy gumibotorral egy egyedi edényből, amelynek alján egy kisebb edényt (tálcát) helyezünk, amely alkalmas a forrásban történő fertőtlenítésre.
A bőséges, vizes székletből származó anyagok bevételéhez használhat egy gumi katétert, amelynek egyik végét a végbélbe helyezik, a másik pedig az üvegbe kerül. A folyékony széklet szabadon áramlik a hajóba vagy a hasfal könnyű masszázsával.
Az abszorbens pamutból származó steril rektális vattapálcát 5-6 cm mélységben beviszik a végbélbe, összegyűjti a bélfal tartalmát, és 1% -os peptonvízzel egy injekciós üvegbe vagy kémcsőbe merít.
Az anyag bevétele előtt egy steril, alumíniumhuzal steril hurkot nedvesítünk steril 0,9% -os nátrium-klorid-oldattal, és 5-6 cm-re injektáljuk a végbélbe.
A kórházban a duodenális intubációval bevitt epe. Két adagot külön csövekben gyűjtöttünk össze: az epehólyag- és az epevezetékekből (B és C). Az anyag natív.
A halott és gyanús kolerából a vékonybél felső, középső és alsó részéből körülbelül 10 cm hosszúságú szegmensek, a bemetszés a kettős ligatúrák között történik, amelyek korábban a bél lefedett területének mindkét végén helyezkedtek el. A csatorna ligálása után az epehólyagot teljesen eltávolítjuk. A bél és az epe tartalmát a testből steril fecskendővel, legfeljebb 10 ml térfogatú tűvel lehet bevenni, és 1% -os peptonvízzel ellátott tartályba kell vinni. A holttestek mintáit külön-külön steril edényekben veszik fel.
A vízálló dugókkal és pergamenpapírral borított anyagokkal ellátott csöveket óvatosan kezeli a külső részből fertőtlenítőszerrel megnedvesített ruhával, elkerülve, hogy belsejébe szivárogjon. Minden mintát fel kell címkézni, elhelyezni egy speciálisan szállításra előkészített fémtartályban, amelyet egy társasági járművön szállítanak kísérő személyrel. Az áttételi űrlap az 1. függelékben található.
5.1.2. Környezeti tárgyak mintavétele
A vizsgálathoz szükséges vizet (ivóvizet, felszíni víztesteket stb.) 1 l / minta mennyiségben, 500 ml-es térfogatban steril edényekben, vízálló dugóval végezzük.
A vízmintákat a vízcsapokból vettük ki, miután előzetesen alkoholos fáklyával égették, és a vizet 10 percig leeresztették, amikor a csap teljesen kinyílt.
A háztartási szennyvizet kétféleképpen kutatják: 1 liter térfogatban két 500 ml-es tartályban vagy 10 × 10 cm méretű, 10-15 rétegben hajtogatott gézszalvétákból készített tamponokkal. Ez utóbbi a vízfelvétel helyén van rögzítve, egy nappal később egy steril edénybe helyezve és a laboratóriumba szállítva.
A víztározók (halak, békák, stb.) Bármilyen módon fognak a tartályokból, és zárt bankokban a vödrök és más hajók szállítják a laboratóriumba.
Szilárd és fitoplankton (algák) is steril edényekbe kerülnek, és a laboratóriumba szállítják.
A zooplankton (daphnia, ciklopok stb.) A csoportos módszerrel vizsgálható, a tartály egyik részében elkapott 10-30 példányt egy terménybe egyesítve. Ebben az esetben egy hajón szállíthatók. A halak tanulmányozása során vegye fel a gyomor és a gillek tartalmát.
A különböző környezetvédelmi tárgyakból készült törlőkendőket egy 0,9% -os nátrium-klorid oldattal megnedvesített pamut vagy gézlemezzel 10x10 cm-es felületről kell venni.
A legyek összegyűjtéséhez szórólapokat helyeznek el, amelyekbe 1% -os 1% -os cukrot tartalmazó peptonvizet öntünk.
Az élelmiszer kitörése a kitörés során és az indikációk szerint az élelmiszertermékek 200 g sűrű és 0,5 liter folyadékot tartalmaznak, amelyeket üvegedénybe helyeznek, és zárták. Ha szükséges, 1% -os koncentrációig a folyékony termékekhez bázikus peptont adunk.
A környezetvédelmi objektumok mintáit fel kell tüntetni, kitölteni egy referenciával (2. függelék), és küldeni kell egy laboratóriumba, a futárszolgálattal a jelenlegi közös vállalkozásnak megfelelően.
A mintavételhez mellékelt elemek listáját lásd a 3. függelékben.
A kolera bakteriológiai vizsgálata különböző tápközegeket használ: dúsító folyadékokat, lúgos agart, választott differenciáldiagnosztikai közeget és azonosító adathordozót.
Száraz termelési környezeteket használnak, amelyek állami nyilvántartási számokkal és engedélyekkel rendelkeznek, vagy a 7. pontban leírt készítmények és technológiák szerint előállított konzerválószerek. A kolera diagnosztikában használt tápközegeket bakteriológiai ellenőrzésnek vetik alá az előírt módon.
Az agar tápközeget használat előtt alaposan meg kell szárítani. A vetést úgy végezzük, hogy az izolált telepek formájában növekedjen. Minden növényt 37,0 ± 0,5 ° C-on inkubálunk.
A vizsgált anyag minden szakaszában termesztett növényeket 6-8 órán át 1% -os peptonvízben, kálium-tellurittal (12-18 óra), lúgos agaron - legalább 14-16 órán át - és sűrű, választható médiumokon - 18 óráig - növesztünk. 24 óra. A vizsgálati anyag bevezetése előtt a kálium-telluritot hozzá kell adni 1% -os peptonvízhez, amelynek pH-értéke nem alacsonyabb, mint 8,3 ± 0,1. A tellurit-kálium (1: 1000) munkaoldatának tárolási ideje 7 nap, a tápközeg kálium-tellurittal nem több, mint 2 nap, feltéve, hogy hűtőszekrényben tartják.
5.2.1. A betegekből és a vibrio hordozókból származó minták vizsgálata, metszetanyag (1. ábra)
1. ábra. A kolera laboratóriumi kutatásának rendszere
A széklet, a betegek hányása, valamint a bél, az epehólyag és a corpus kis intestinalis nyálkahártya 0,5-1,0 ml térfogatú szuszpenziójának tartalmát pipettával injektáljuk 50-100 ml tárolóközegbe, lúgos agarra és az egyik választható közegre hurkolva. (SADH, TCBS).
A feltételezett kolera-betegségben szenvedő betegek anyagának vizsgálatakor nem szabad 1% -os peptonvizet használni kálium-tellurittal tárolóközegként.
Abban az esetben, ha a gyanús kolera betegekből származó anyagot felvehetünk, gyorsított kutatási módszerek alkalmazhatók: immunolumineszcens, immobilizálás és PCR specifikus primerekkel (lásd a 6. részt) a vizsgálat első, második és későbbi szakaszában.
A gyanús rezgéshordozók anyagát 50 ml gyűjtőközegben oltjuk be egyéni vizsgálatokban és 100 ml-ben csoportos vizsgálatokban, legfeljebb 5 főből álló mintákat kombinálva egy 0,5-1,0 ml-es üvegben. A csoportos növényeket ritka esetekben használják, amikor tömeges felméréseket végeznek a vibrációs hordozókkal kapcsolatban.
Az 5 ml 1% -os peptonvízben lévő anyagot 50 ml tárolóközegbe való vetéshez teljes mértékben használják. Ha az injekciós üvegben 50 ml 1% -os peptonvízben gyűjtött anyagot helyeznek a laboratóriumba, és a mintavétel után legkésőbb 2 órával szállítják, a fiolát 6 órán át termosztátba helyezik a kórokozó felhalmozódásához. Az anyag későbbi beadása után 5 ml-t 50 ml 1% -os pepton vízbe vetünk.
Bizonyos esetekben a kolera kórokozójával szemben antibiotikumokat szedő személyek anyagának bakteriológiai vizsgálatát 200-300 ml 1% -os pepton vízbe (előnyösen széles szájú lombikba) és 2 csésze alkáli agarba vitték be, növekedés izolált telepek formájában. A növényeket 37 ° C-on 24 órán át inkubáljuk, és 8-10 órás inkubálás után a táptalaj felszínrétegéből a lúgos agarlemezeken levő szekvenciát vetjük. A második dúsítóközeg használata ebben a kutatási lehetőségben nem megfelelő.
II. Szakasz (6-8 óra elteltével a vizsgálat kezdetétől)
Az első felhalmozódási közegből a vetést alkalikus agaron és az egyik választható közegben és 5-8 ml második akkumulációs közegben végezzük. A folyékony és sűrű közegbe történő szubkultúrák egy nagy bakteriológiai hurkot alkotnak, amelynek átmérője a folyékony közeg felületétől 5 mm.
Ha a natív anyag vizsgálatának eredményei gyorsított módszerekkel negatívak, akkor az első felhalmozódási közeg inkubálása után 6 órával megismétlik őket.
III. Szakasz (a vizsgálat kezdetétől számított 12-16 óra)
Vetés a második akkumulációs közegből alkáli agarra.
Ha szükség van a kolerát feltételező betegek anyagának elemzésének felgyorsítására, akkor a vizsgálat kezdetén már elkezdett, lúgos agarból származó telepek kiválasztása már ebben a szakaszban, más esetekben megkezdhető.
IV. Szakasz (18-24 óra elteltével a vizsgálat kezdetétől)
A Vibrio cholerae gyanús gyarmatok kiválasztása a termőhelyen a természetes anyag sűrű közegében, valamint az első és második tárolóeszköz vetésében.
a) A növényi ételeket átvilágított fényben, szemmel vagy nagyítóval szkenneljük, valamint (különösen este és éjszaka) sztereoszkópos mikroszkóp alatt ferdén átvilágított fényben és kiválasztott kolóniákat, amelyek gyanúsak a vibriók számára a tenyészet izolálására és azonosítására.
A lúgos agaron a serogrupp kolera vibrio O1 és O139 kolóniái tipikus S-alakúak kerek, sima, lapos, kékes, homogén, sima élekkel, átlátszó fényben és világos szürke színben, kék vagy zöldes árnyalattal, sztereoszkópos mikroszkóp alatt ferdén átvilágított fényben (prilozh.5).
A Vibrio cholerae kolóniái TCBS és SADH szelektív környezetekben fényes sárga színűek egy zöld vagy kék háttér közegben, áttetsző. A 10-12 órás inkubálás után lúgos agaron lévő telepek méretei általában nem haladják meg az 1 mm-t, és 18-24 óra alatt átmérőjük 2-3 mm. A Vibrio cholerae-ban a választott közegben a kolónia kialakulásának üteme némileg lelassult, így a növények SADH-n vagy TCBS-en történő megtekintését legkorábban 18-20 órányi inkubáció után kell elvégezni, amikor a méreteik közelednek az alkáli agaron növekvő telepekhez.
Bizonyos esetekben atípusos telepek is megtalálhatók a növényekben: sáros, sűrű központú, pigmentált (barna vagy világos sárga), a legkisebb kókuszszerű, durva. Ne feledjük, hogy a tápközegek összetétele és minősége befolyásolja a kolera vibrio kolóniák méretét és sűrűségét, valamint a sejtmorfológiát.
b) A telepek kiválasztásánál az indofenol-oxidáz mintáját egyetlen komponensű reagenssel (alfa-naftol nélkül) használhatjuk, a SIB-1 készlet indikátorpapírjával, a vibriók vagy az OXI-teszt rendszer azonosítására. A választott táptalajon talált telepeknél az oxidáz mintákat nem ajánljuk.
c) A gyanús kolóniákat 1: 50-1: 100 hígítással ellenőriztük az O1 szérum-kolerával. Pozitív reakcióval és elegendő számú gyanús kolóniával, az Inaba és az Ogawa variáns-specifikus szérumával végzett csúszás-agglutinációt ugyanazon hígítással végezzük, a Gram festéshez és fluoreszcens immunoglobulinokkal történő kezeléshez kenetet készítünk. Negatív eredménnyel a páciensekből származó anyagból származó kolóniákat O139 és PO kolera szérumokkal végzett csúszás agglutinációval ellenőrizzük.
Pozitív, körülbelül 1: 100-as hígítású, 1: 100-as hígítású, 1: 100-as hígítású, vagy a fluoreszcens immunoglobulinokkal morfológiai, kulturális jellemzőkkel és specifikus immobilizációval rendelkező pozitív reakcióval rendelkező agarutinációs reakció lehetővé teszi számunkra, hogy megfelelő szakaszban előzetes választ adjunk a kolera vibrio kimutatására a vizsgálati anyagban O1, és O139 szérummal pozitív reakció esetén a kolera vibrio O139 szerocsoport.
d) A vibriókat gyanús kolóniák, az O1 és O139 kolerákkal agglutinálódnak és nem agglutinálódnak a polikarbonát (laktóz-szacharóz, Ressel, Kligler, mannóz-szacharóz, stb.) egyikén és (vagy) egy lúgos agar lemezen a kisütéshez tiszta kultúra, annak azonosítása és az antibiotikumokkal szembeni érzékenység meghatározása.
V. szakasz (a vizsgálat kezdetétől számított 24-36 óra elteltével)
A tenyészetek kiválasztása az azonosításhoz
A vibriók növekedési mintáira és változásaira jellemző kultúrákat polikarbonát médiumokon választunk ki:
- a két szénhidrát közegben (laktóz-szacharóz, glükóz-laktóz és Kligler) megfigyelhető a savas reakcióra jellemző oszlop színének változása, miközben a ferde rész színét gáz nélkül, valamint hidrogén-szulfidot tartva fenntartva a Kligler közegben külön törzsekkel a kéntartalmú komponensek felosztása miatt;
- a mannóz-szacharóz közegben mindkét szénhidrát erjedése következtében mind az oszlop, mind az átlós rész festett, és bizonyos esetekben a hidrogén-szulfid képződése csapdába kerül.
A lúgos agaron tenyésztett tenyészeteket indofenol-oxidáz jelenlétére vizsgáljuk.
Határozzuk meg a mikroorganizmusok morfológiáját és az alkáli agar és polikarbonát környezetben termesztett kiválasztott tenyészetek tisztaságát Gram-festett kenet segítségével.
Azokat a tenyészeteket, amelyek jellegzetes változásokat eredményeznek a polikarbonát-közegben, és pozitívak az oxidáz tesztben, 1: 100, RO, Inaba és Ogawa hígítással 1:50, RO, Inaba és Ogawa indukciós csúszási agglutinációval vizsgáljuk 1:50 arányban. Ha ezeknek a szérumoknak a negatív eredményei a kolera szérum O139 szerocsoportjával csúsztatott agglutinációt eredményeznek, a használati utasításnak megfelelően használják.
Az O1, Inaba vagy / és Ogawa szérumokkal végzett agglutináció pozitív eredményei alapján előzetes pozitív választ adunk a megfelelő szerovár kiválasztására a kolera vibrio O1 tenyészet vizsgált anyagából.
Ha a kiválasztott tenyészet reagál az O139 kolera szérummal negatív eredménnyel a szérum O1 szerocsoporttal, adjon választ a kolera vibrio O139 szerocsoport kiválasztására.
Az O1, PO vagy O139 oxigén-pozitív tenyészetekből származó szerocsoportok agglutináló és nem agglutináló szerocsoportjait, a polimer O1, PO és O139 szérummal nem agglutinált redukált vagy teljes mintával, a fő generikus karakterek azonosítása céljából.
VI. Szakasz (36-48 óra a vizsgálat megkezdése után)
Az azonosítás eredményeit figyelembe vesszük, és a végső választ a megfelelő szerocsoport és biovár kolera vibrio tenyészetének kiválasztásáról adjuk meg.
Az O1 kolera vibriók esetében a járvány jelentőségét nagyjából a hemolitikus aktivitás és az Eltor fágok érzékenységének vizsgálata alapján, a speciális intézményekben pedig a kiválasztott ctx AB (A) gén jelenlétének a genomban, valamint a nyúl modell toxicitásának eredményei alapján végeztük. - szopók A serócsoport cholera vibrio O139 epidemiológiai jelentőségét ugyanazok a vizsgálatok határozzák meg, kivéve az Eltor fágokra és az érzékenységre gyakorolt érzékenységet. A vizsgálat ezen szakaszának végén meg kell határozni az izolált tenyészet antibiotikum érzékenységét.
A kolera-O1 és O139 szérummal nem agglutinálódó beteg- vagy vibrio-hordozóból származó kolera vibrio tenyészet izolálásakor választ adnak a kolera vibriók kiválasztására, nem az O1-re és az O139-re. Vibrionos agglutináló diagnosztikai szérumok jelenlétében más szerocsoportokhoz (O2-O83) való kötődésüket határozzuk meg.
A RO-szérum agglutinált tenyészeteinek azonosítását lásd az 5.3 pontban.
5.2.2. Környezeti tárgyak tanulmányozása
A környezeti objektumok elemzési sémája különbözik a páciensektől származó anyagkutatási sémától, csak az I. szakaszban, a II-VI.
a) Felszíni víz és vezetékes víz
A minta kézbesítésének időpontjától függően a következő típusú növények lehetségesek a vibriók elsődleges felhalmozódásához:
- a vizsgálati vízhez 1% -os koncentrációjú bázikus peptonoldatot adunk, szükség esetén a pH-t 10% -os nátrium-hidroxid-oldattal lúgosítjuk, pH 8,4 ± 0,1 értékre. Az első felhalmozódási közegben az inkubációs idő 8-10 óra, a második felhalmozási közeg térfogata 10 ml; inkubációs idő a tápközegben kálium-tellurit nélkül - 6 óra, kálium-tellurittal - 18-20 óra;
- bázikus pepton oldatot adunk a vizsgálati vízhez 1% -os koncentrációig és a kálium-telluritot 1: 1000-től 1: 100 000 vagy 1: 200 000 koncentrációig. A pH-t 8,4 ± 0,1 értékre állítjuk be. Inkubációs idő 18-24 óra; a második felhalmozási közeg 10 ml kálium-tellurit nélküli tápközeg, az inkubációs idő 6-8 óra;
- A vízmintákat tesztelhetjük Progress detergens alkalmazásával is, 0,1-0,2% koncentrációban egy idegen flóra gátlójaként; az alap peptonoldat 1% -os koncentrációhoz való hozzáadását és lúgos reakciót követően a mintákat reggelig (az első felhalmozódási közeg) szobahőmérsékleten (legfeljebb 25 ° C-on) tartjuk. A következő nap elején a felszíni réteg 5 ml-ét 100 ml 1% -os pepton vízben (második felhalmozódási közeg) vetjük és lúgos agarra vetjük; a második felhalmozódási közegből való vetés 6-8 óra inkubálás után történik;
- A vizet N 2 vagy 3 membránszűrőn keresztül szűrjük, amelyekből a mosófolyadékokat a tárolóközegbe és agarlemezekre vetjük. A szűrőből származó törlőkendők fluoreszcens kolera immunglobulinokkal történő festéshez, valamint specifikus primerekkel történő RNSA előállításához használhatók.
A minták intenzív bakteriális szennyeződésével III felhalmozódási közeg használható.
b) Háztartási szennyvíz
Az 1 liter térfogatban szállított szennyvizet egy papír- vagy szövetszűrőn keresztül szűrtük ki a mechanikai szennyeződések eltávolításához (ha szükséges).
Miután a pepton bázikus oldatát hozzáadtuk a mintákhoz, a pH-t 8,4 ± 0,1 és 1% közötti koncentrációra állítottuk be, és 500 ml térfogatban inkubáltuk 8-10 órán át (1 felhalmozódási közeg) vagy kálium-tellurit 1: 100 000 (1: 200 000) hozzáadásával. ) - 18-24 óra.
A szennyvíz gézlemezzel történő összegyűjtésekor az utóbbit széles nyakú lombikba vagy üvegbe helyezzük, 500 ml tárolóközeggel, majd a fentiek szerint vizsgáljuk.
Közvetlenül a vizsgálatot megelőzően a béka immobilizálódik a gerincvelőbe behelyezett tűvel, és a hasítótáblára rögzítve. A has felületét alkohollal kezelik, és ollóval mediális metszést végeznek. Az epehólyagot levágják a májból, vágjuk le és lenyomják az alkáli agar lemezére. Az epe maradványait az epehólyaggal együtt az injekciós üvegbe 50-100 ml 1% -os peptonvízzel helyezzük. A gyomor tartalmát 1% -os pepton vízbe vittük, és a fal belső felületét az agarlemezeken készítjük. A bél vetését ugyanúgy végzik, ha a bél felső, középső és alsó részén több hurkot vágunk le.
A nagy halakban ugyanúgy az epehólyag, a gyomor, a belek és a gillek tartalmát a tárolóközegbe vetik. Kis halak (sütjük) ollóval 10-20 példányban zúzva. egy mintát, és a szuszpenziót egy hurokba vetjük az agarlemezre és 1% -os pepton vízben.
A Daphnia, a Cyclops és más rákfélék, valamint a fitoplankton habarcsban őrlik és 1% -os pepton vízbe vetik.
A rákokban megvizsgálják a béleket és a gilleket, így a tartalom vetését a felhalmozódási közegbe és az agar táptalajra nyomtatott nyálkahártyát vetik fel.
d) Élelmiszertermékek
Az alkoholmentes italokat ugyanazzal a módszerrel vizsgálják meg, mint a vizet.
5 ml mennyiségű tejet 50-100 ml-ben vittünk fel, vagy egy 0,5 ml tejhez hozzáadtunk egy bázikus peptonoldatot a tej 1% -os koncentrációjáig. Más tejtermékeket (kefir, tejföl, túró, fagylalt stb.) 5-10 ml mennyiségben 1% -os pepton vízbe vetünk.
A szilárd ételekből 25 g súlyú, 2-3 g kvarchomok és sóoldattal steril habarcsban őröljük, majd 125 ml tárolóközegbe és hurokba helyezzük az agar táptalajra.
Az olajat 5-10 g mennyiségű folyadékgyűjtő közegbe vetik, termosztátban lágyítva, vagy darabjainak felületéről vetődik fel.
A vetés után a termék pH-ja 8,4 ± 0,1.
e) A környezeti tárgyakból és legyekből származó törlőkendőket 1% -os pepton vízbe vetik, és a szokásos módon vizsgálják.
5.2.3. A kutatás sorrendje egy műszakos laboratóriumi munkában
A kolera felügyelete során a vizsgált kontingensek anyagának tanulmányozása az alábbi változatokban történhet.
a) Első vagy második felhalmozódási közegként 1% -os peptonvizet (pH 8,4 ± 0,1) kálium-tellurittal 1: 100000-1: 200000 végkoncentrációban alkalmazunk a kontroll eredményeinek megfelelően.
A szállítóközeg kiválasztásának és a kutatási sorrendnek a kérdését a mintavétel időpontjától a laboratóriumba történő átvételétől számított időbeli különbségtől függően határozzák meg. Az 1. táblázatban bemutatjuk a páciensektől 1% -os peptonvízben történő anyaggyűjtés és a kolera további kutatására szolgáló eljárást. A mintavételi munkahét alatt 5–10 ml térfogatú, 5–10 ml térfogatú, tellurit-kálium nélküli peptonvizet, injekciós üvegben vagy kémcsőben (szállító közeg).
Az anyag vizsgálatának sorrendje, a kiválasztás időpontjától és a laboratóriumba történő szállítástól 1% PV-ban