logo

A glicin - az egyik lényeges aminosav, amely az emberi szervezetben fehérjéket és más biológiailag aktív anyagokat alkot.

A glicint úgy nevezték el, hogy édes ízű (a görög glikkos édes).

Glicin (glicin, amino-ecetsav, aminoetánsav).

A glicin (Gly, Gly, G) az NH szerkezete2-CH2-COOH.

A glicin optikailag inaktív, mivel a szerkezetben nincs aszimmetrikus szénatom.

A glicint először Braconnot-tal izoláltuk 1820-ban savas zselatin hidrolizátumból.

A glicin napi szükséglete 3 gramm.

Fizikai tulajdonságok

Glicin - édes ízű, színtelen kristályok, amelyek olvadáspontja 232-236 ° C (bomlással). Vízben oldódik, alkoholban és éterben oldhatatlan, aceton.

Kémiai tulajdonságok

A glicin közös és specifikus tulajdonságokkal rendelkezik az aminosavaknak köszönhetően az aminosavak és a karboxilcsoportok szerkezetének jelenléte miatt: belső sók képződése vizes oldatokban, sók képződése aktív fémekkel, oxidokkal, fémhidroxidokkal, sósavval, acilezéssel, alkilezéssel, az aminocsoport dezaminálásával a gigenagenidek, észterek képződése, a karboxilcsoport dekarboxilezése.

A szervezetben a glicin fő forrása a cserélhető aminosav szerin. A szerin glicinné történő átalakulása könnyen visszafordítható.

Biológiai szerep

A glicin nem csak a fehérjék és a glükóz bioszintéziséhez szükséges (a sejtek hiánya miatt), hanem a hem, nukleotidok, kreatin, glutation, komplex lipidek és más fontos vegyületek esetében is.

A glicin-származék, a glutation tripeptid szerepe fontos.

Antioxidáns, megakadályozza a peroxidot

a sejtmembránok lipid oxidációja és megakadályozza azok károsodását.

A glicin részt vesz a sejtmembrán komponensek szintézisében.

A glicin gátló neurotranszmitterekre utal. Ez a glicin hatása kifejezettebb a gerincvelő szintjén.

A glicin nyugtató hatása az aktív belső gátlás folyamatainak fokozására és nem a fiziológiai aktivitás elnyomására épül.

A glicin megvédi a sejteket a stressztől. A nyugtató hatás az ingerlékenység, az agresszivitás, a konfliktusok csökkenésében nyilvánul meg.

A glicin növeli az elektromos aktivitást egyidejűleg az agy elülső és nyaki részén, növeli a figyelmet, növeli a számlálási sebességet és a pszichofiziológiai reakciókat.

A glicin alkalmazása a rendszer szerint 1,5-2 hónapig a vérnyomás csökkenéséhez és stabilizálásához, a fejfájás eltűnéséhez, a memória javításához, az alvás normalizálásához vezet.

A glicin alkalmazása segít megelőzni a gentamicin által okozott veseelégtelenséget, pozitívan befolyásolja a vese szerkezeti változásait, megakadályozza az oxidatív stressz kialakulását és csökkenti az antioxidáns enzimek aktivitását.

A glicin csökkenti az alkohol toxikus hatásait. Ez annak a ténynek köszönhető, hogy a májban képződött acetaldehid (az etanol-oxidáció toxikus terméke) glicinnel kombinálódik, acetil-glicinné alakul - hasznos vegyület, amelyet a szervezet fehérjék, hormonok, enzimek szintéziséhez használ.

Az idegrendszer munkájának normalizálása során a glicin csökkenti az ivás patológiás vonzerejét. Ezek szakmailag kezelt, krónikus alkoholisták, akiket a delirium tremens megakadályozására és megakadályozására írnak fel.

A glicin csökkenti a toxikózis előfordulását a terhesség alatt, a vetélés veszélyét, a víz késleltetését, a magzat fulladását.

A glicinnel rendelkező nőknél kevésbé valószínű, hogy veleszületett hipotrófiával rendelkeznek gyermekekkel, születési sérülésekkel nem járó újszülöttek és az agyszöveti struktúrák károsodása, többszörös veleszületett rendellenességek, és az újszülöttek nem voltak halandók.

Természetes források

Marha, zselatin, hal, tőkehal, csirke tojás, túró, mogyoró.

Alkalmazási területek

Nagyon gyakran a glicint gyermekkori betegségek kezelésére használják. A glicin alkalmazása pozitív hatással van a vegetatív-vaszkuláris dystonia kezelésére, pszichoszomatikus és neurotikus betegségekben szenvedő gyermekeknél, az agy akut ischaemiajában, epilepsziában.

A glicin alkalmazása gyermekeknél növeli a koncentrációt, csökkenti a személyes szorongás szintjét.

A glicint arra is használják, hogy megakadályozzák a korai alkoholizálódást és a serdülők kábítószerét.

Drog "Glycine"

A glicint asthenikus körülmények között használják, hogy növeljék a mentális teljesítményt (javítja a mentális folyamatokat, az információ észlelésének és memorizálásának képességét), pszicho-érzelmi stresszel, fokozott ingerlékenységgel, depressziós állapotokkal, az alvás normalizálására.

Az alkoholfogyasztás csökkentésének eszközeként az idegrendszer különböző funkcionális és szerves betegségei (cerebrovascularis baleset, az idegrendszer fertőző betegségei, a traumás agyi sérülés következményei).

A gyógyszert a nyelv alatt használják, mert a hypoglossal ideg magja területén a glicin receptorok sűrűsége a legnagyobb, és ennek következtében a glicin hatására az érzékenység ezen a területen maximális.

A glicinszármazék Betaine (trimetil-glicin) szintén fiziológiai aktivitással rendelkezik.

A betainok gyakoriak az állati és növényi világban. Ezek tartalmazzák a cékla, a Labia család képviselőit.

A betain-glikokol és sói széles körben használatosak az orvostudományban és a mezőgazdaságban.

A trimetilglicin részt vesz az élő szervezetek metabolizmusában, és a kolinnal együtt a máj és a vesék betegségeinek megelőzésére használják.

http://himija-online.ru/organicheskaya-ximiya/aminokisloty/glicin.html

Az aminosavak, peptidek, fehérjék minőségi reakciói

Az aminosavak színreakcióval detektálhatók: ninhidrin, xanthoprotein, Fol, Milon, biuret minták stb. Ezek a reakciók nem specifikusak, mert az aminosavak szerkezetében lévő egyes fragmensek kimutatásán alapul, amelyek más vegyületekben előfordulhatnak.

Ninhidrin reakció, színreakció, aminosavak, aminosavak és aminok minőségi és mennyiségi meghatározására. Lúgos környezetben ninhidrint (triketohidrin-ninhidrát, C9HbOh4) elsődleges aminocsoportokkal rendelkező anyagokkal (-NH2) egy olyan termék képződik, amely stabil, intenzív kék-lila színnel rendelkezik, maximális felszívódása körülbelül 570 nm. Mivel az ilyen hullámhosszon történő felszívódás lineárisan függ a szabad aminocsoportok számától, a ninhidrin reakció alapja volt a mennyiségi meghatározásnak kolorimetriával vagy spektrofotometriával. Ezt a reakciót alkalmazzuk a szekunder aminocsoportok (> NH) meghatározására a prolin és a hidroxi-prolin aminosavaiban; ebben az esetben fényes sárga termék keletkezik. Érzékenység - 0,01% -ig. A modern automatikus aminosav-analízist az aminosavak ioncserélő szétválasztásának és a ninhidrin-reakcióval történő mennyiségi meghatározásuk kombinálásával végezzük. Az aminosavak keverékeinek papírkromatográfiával való elválasztásakor minden aminosavat legalább 2–5 μg mennyiségben lehet meghatározni.

A szín intenzitása az aminosavak mennyiségének megítéléséhez használható.

Ez a reakció nemcsak szabad aminosavakkal, hanem peptidekkel, fehérjékkel stb.

A xantoprotein reakció lehetővé teszi aromás aminosavak (fenilalanin, tirozin, hisztidin, triptofán) kimutatását az aromás mag elektrofil szubsztitúciójának reakciója alapján (nitrálás).

Koncentrált salétromsav hatására például tirozinra sárga színű terméket kapunk.

Reakcióhiba. Ez a ciszteinre és a cisztinre adott reakció. A lúgos hidrolízis során a ciszteinben és a ciszteinben a „gyengén kötött kén” elég könnyen leválasztható, ami hidrogén-szulfid képződéséhez vezet, amely alkáli reagáltatásával nátrium- vagy kálium-szulfidokat eredményez. Ha ólom (II) -acetátot adunk hozzá, az ólom (II) -szulfid csapadék színe szürke-fekete.

A tapasztalat leírása. A csőbe 1 ml cisztinoldatot öntünk, hozzáadunk 0,5 ml 20% -os nátrium-hidroxid-oldatot. Az elegyet forrásig melegítjük, majd 0,5 ml ólom (II) -acetát-oldatot adunk hozzá. Szürke-fekete ólom (II) -szulfid csapadék figyelhető meg:

Zimmerman reakció. Ez a glicin aminosavra adott reakció.

A tapasztalat leírása. 2 ml 0,1% -os glicin-oldathoz, amelyet 10% -os lúgos oldat hozzáadásával 8-ra állítottunk be, 0,5 ml o-ftaldehid vizes oldatát adtuk hozzá. A reakcióelegy lassan világos zöld színűvé válik. Néhány perc elteltével zöld csapadék esik ki.

Reakció a triptofánra. A triptofán savas környezetben aldehidekkel reagáltatva színes kondenzációs termékeket képez. Például glikoxilsavval (amely koncentrált ecetsav keveréke) a reakció az alábbi egyenlet szerint megy végbe:

A triptofán és a formaldehid reakciója hasonló módon megy végbe.

Sakaguchi reakciója. Az arginin aminosavra adott reakció az arginin és az a-nafol kölcsönhatásán alapul oxidálószer jelenlétében. A mechanizmus még nem teljesen tisztázott. Nyilvánvaló, hogy a reakciót az alábbi egyenlet szerint hajtjuk végre:

Mivel a kinon-iminszármazékok (ebben az esetben a nafto-kinon), amelyben az imino-NH-csoport hidrogénatomja alkil- vagy arilcsoporttal helyettesített, mindig sárgás-vörös színben festik, az oldat narancssárga-vörös színe a Sakaguchi-reakció megjelenésének köszönhető. Naftoquinone imine. Nem kizárt azonban, hogy az arginin-maradék NH-csoport további oxidációja következtében még bonyolultabb vegyület képződik, és az a-naftol benzolmagja további oxidációja következtében:

A tapasztalat leírása. 2 ml 0,01% -os arginin oldatot öntünk a csőbe, majd 2 ml 10% -os nátrium-hidroxid-oldatot és néhány csepp 0,2% -os alkoholos alkohol-oldatot adunk hozzá. A kémcsövek tartalmát jól összekeverjük, 0,5 ml hipobromit oldatot öntünk és ismét összekeverjük. Azonnal hozzáadunk 1 ml 40% -os karbamid-oldatot a gyorsan fejlődő narancssárga-vörös festés stabilizálásához.

Biuret reakció - színreakcióként a fehérjékhez. Lúgos közegben réz (II) sók jelenlétében lila színt adnak. A szín a réz (II) komplex vegyület képződéséből adódik, ami a fehérjékre jellemző "-CO-NH-" peptidcsoportnak köszönhető. Ezt a reakciót karbamidszármazékból, biuretből kapta meg, amely akkor keletkezik, amikor a karbamidot ammónia eltávolításával melegítjük:

A fehérjék és a biuret mellett ugyanez a festés más vegyületeket is tartalmaz, amelyek a következő csoportot tartalmazzák: amidok, karbonsavak imidjei, valamint a molekula-CS-NH- vagy = CH-NH- csoportot tartalmazó vegyületek. Szintén a fehérjék, néhány aminosav, peptid, biuret és közepes pepton adja a reakciót.

A különböző peptidekkel végzett biuret reakcióval kapott komplex színe némileg eltérő, és a peptidlánc hosszától függ. Négy aminosav-maradékot tartalmazó peptidek és a fentiek szerint vörösvörös komplexet képeznek, a tripeptidek lila, a dipeptidek kékek.

a polipeptid keton formája

polipeptid enol formája

A polipeptid és Cu (OH) közötti kölcsönhatásban2 egy komplex képződik, amelynek szerkezete a következőképpen látható:

http://poznayka.org/s69766t1.html

Az aminocsoport reakciói a glicin példáján

Az alifás aminosavak nehézfémsókkal képzett sóinak képződését az aminosavak azonosítására használják (kvalitatív reakció). Amikor az aminosavak alkáli közegben kölcsönhatásba lépnek réz-szulfáttal, rézsók képződnek, amelyekben a rézionot nitrogénatomokkal kötött további értékek kötik össze, amely sötétkék színű összetett iont képez.

Minőségi reakciót hajtottak végre alifás aminosavakhoz réz-szulfáttal egy lúgos közegben (a reakció azon a képességen alapul, hogy a karboxil- és a-amino-csoport miatt kelát-típusú komplex vegyületek képződnek a Cu 2+ kationnal).

A ninhidrinnel való reakció kvalitatív az alifás aminosavakra:

A legfontosabb aminosav-reakció a polimerizáció. A fehérjék képződésének alapja, élő szervezetekben előfordul, és enzimek katalizálják.

Az egyik molekula aminocsoportja kölcsönhatásba lép egy másik molekula karboxilcsoportjával.

AMINÓKAPCSOLATOK KÜLÖNLEGES REAKCIÓI (fűtéssel kapcsolatos):

Két különböző funkcionális csoport aminosavainak jelenléte molekulákban számos specifikus tulajdonság megjelenéséhez vezet, amelyek általában hasonlóak a hidroxisavak tulajdonságaihoz.

A COOH csoport a molekula elektrofil központja, és a csoport NH2- nukleofil központ, amely képes kölcsönhatásba lépni. Ez a kölcsönhatás a molekula funkcionális csoportjainak helyétől függően intermolekulárisan vagy intramolekulárisan előfordulhat.

1. α-aminosavak - intermolekuláris interakcióba lépni.
Az eredmény egy stabil, hat tagú ciklus - di-ketopiperazin. Képes hidrolizálni az eredeti α-aminosavakká.

2. β-aminosavak - az ammóniát leválasztjuk, ami α, β, -limitáns savak képződéséhez vezet.

3. γ-aminosavak - intramolekuláris kölcsönhatásba lépnek.
Ennek eredményeként ciklikus amidokat - γ-laktámokat képeznek. Képesek
hidrolizálják az eredeti aminosavakká.

6. A GYÓGYSZERBEN FELHASZNÁLÓ AMINÓKAPCSOLATOK KÜLÖNLEGES KÉPVISELŐI.

GLUTAMIC-sav - fontos szerepet játszik a test létfontosságú tevékenységében, részt vesz a fehérje- és szénhidrogén anyagcserében, serkenti az oxidatív folyamatokat, elősegíti a szervezetből az ammónia semlegesítését és eliminálását, növeli a szervezet hipoxiával szembeni rezisztenciáját.
Az orvosi gyakorlatban a glutaminsavat a központi idegrendszeri betegségek kezelésére használják: epilepszia, pszichózis, reaktív állapotok, amelyek a kimerültség, a depresszió stb.
Gyermekgyógyászatban a gyógyszert arra használják, hogy késleltesse a különböző etiológiák, a cerebrális bénulás, a Down betegség mentális fejlődését.

anestezina - az egyik legelső szintetikus vegyület

mint helyi érzéstelenítő. Az anesztézia aktív felületű helyi érzéstelenítő szer. Ezt széles körben kenőcsök, porok stb.

Aminalon - serkenti a tanulást, javítja a memorizálás és a memória folyamatát - memóriazavarokkal, craniocerebrális sérülésekkel, az agyi keringés megsértésével.

A mentális fogyatékkal élő gyermekek számára.

GLYCIN (GLYCOL) - enyhíti az ingerlékenységet, javítja az alvást, csökkenti a depressziót.

hisztidin - a gyomorban és a nyombélben fekélyes, hepatitis, ulceratív folyamatok kezelésére használt gyógyszerekben.

metionin - a betegségek és a toxikus májkárosodás kezelésére és megelőzésére használják; a fertőző betegségek után a gyermekek és felnőttek fehérjehiányából eredő dystrophia kezelésére.

CYSTEIN - a szemlencse szürkehályogának és lumenének késleltetésére használják az életkor kezdeti formáiban, myopiában, sugárzásban és kontúziós szürkehályogban.

1) L.M. Pustovalova "Szerves kémia", Rostov-on-Don "Phoenix", 2005.

2) N.A. Tyukavkina, Yu.I. Baukov "Bioorganikus kémia", M. "DROFA", 2004.

3) V.P. Komov, V.N. Shvedova „Biokémia”, M. “DROFA”, 2004

4) MD Mashkovsky "Drugs", M. "New Wave", 2005

FÜGGELÉK

a fehérjéket alkotó aminosavak.

http://poisk-ru.ru/s2186t8.html

Glicin minőségi reakció

Biuret reakció (Piotrovsky-reakció). Egy lúgos környezetben, a fehérjékben és a hidrolízis termékeikben a polipeptidek lila vagy vörös-lila festést kapnak rézsókkal. A reakció peptidkötések jelenlétének köszönhető. A pozitív biuret reakció legalább két vegyületet tartalmaz

peptidcsoportok. A színezés intenzitása a peptid hosszától függ, és kék-ibolyától vörösvörösig és vörösig változik.

Az aszparagin (aszparaginsav-amid) és a hisztidin, treonin és szerin aminosavai szintén biuret-reakciót kapnak.

A reakciót biurettől kaptuk, amely a karbamid melegítésekor képződik. Ezt a reakciót az ammónia molekula eltávolítása kíséri

A peptidek és fehérjék komplex nátrium-réz-sója a következő szerkezetnek tulajdonítható:

Reagensek: a) tojásfehérje oldat (nátrium-klorid hozzáadása nélkül); b) növényi fehérjeoldat (készítmény - lásd a 6. oldalt); c) nátrium-nátrium, 10% -os oldat; g) réz-szulfát, 1% -os oldat.

2 ml tojásfehérje oldatot öntünk egy kémcsőbe, ugyanezt a növényi mennyiséget öntjük a másikba, majd egyenlő térfogatú nátrium-nátrium-oldatot és 1-2 csepp réz-szulfát-oldatot adunk minden egyes csőbe. Megjelenik a vörös-lila vagy kék-lila festés.

Ninhidrin reakció.

A ninhidrin reakció az aminosavak jelenlétében az aminocsoportokból származik. A fehérjék, polipeptidek és aminosavak kék vagy kék-lila vegyületet képeznek ninhidrinnel (melegítve). A ninhidrin reakció az egyik legérzékenyebb az a-aminocsoportok kimutatására.

A reakció lényege abban áll, hogy az a-aminosavak és a peptidek, amelyek ninhidrinnel reagálnak, oxidatív dezamináláson és dekarboxilezésen mennek keresztül:

A redukált ninhidrin kölcsönhatásba lép az ammóniával és a második ninhidrin molekulával, ami színes vegyületet eredményez (ruemann purple).

Reagensek: a) fehérjeoldat (nátrium-klorid nélkül). Főzés - lásd: p. 6; b) glicin, 0,1% -os vizes oldat; c) ninhidrin, 0,1% alkoholos oldat. 1-2 ml glicin oldatot öntünk egy csőbe, és ugyanolyan mennyiségű fehérjeoldatot adunk a másikba. Mindkét csőben hozzáadunk ninhidrin oldatot (az első 5-6 cseppben, a második - 10-12), körülbelül egy percig melegítjük. In vitro glicinnel, lila-kék vagy lila festéssel gyorsan megjelenik, in vitro fehérjékkel festve lassan fejlődik és vöröses-lila színárnyalatú (vagy prolin-imino-sav esetén sárgás-lila).

Reakció Lowry.

Ez a fehérjék egyik legérzékenyebb reakciója. Ciklusos aminosavakat ad. Folin reagensével reagálva kék színű komplexeket képeznek. A szín intenzitása a fehérjék koncentrációjától függ, így a Lowry reakció kvantitatív meghatározásra is alkalmazható.

Reagensek: a) tojásfehér oldat szín- és csapadékreakciókhoz (lásd 6. oldal), 100-szor hígítva desztillált vízzel; b) glicin, 0,02% -os oldat; c) fenilalanin, 0,02% -os oldat; g) A reagens: 2% -os nátrium-karbonát-oldat 0,1 n nátrium-hidroxid-oldatban; e) B reagens: 0,5% réz-szulfát-oldat 1% diszubsztituált kálium- vagy nátrium-tartarát-oldatban (); c) C reagens: 1 ml B reagenst pipettázunk 50 ml A reagensre; g) Folin reagens: hőálló üveg lombikjában 700 g nátrium-volframátot (nátrium-volframát) és 25 g nátrium-molibdátot (nátrium-molibdát) 700 ml desztillált vízben oldunk. Az oldathoz 50 ml koncentrált ortofoszforsavat és 100 ml-t adunk.

tömény sósavoldatot adunk hozzá, majd visszafolyó hűtőt adagolunk a lombikba, majd át kell tölteni egy füstelszívóba, és forraljuk 10 órán át, elkerülve a folyadék erőteljes forráspontját. Ezután 150 g desztillált víz lítium-szulfátját, 5 csepp brómot adunk a lombikhoz, és főzzük (hűtőszekrény nélkül) 15 percig. a felesleges brómból való felszabadulásra. Miután az oldat szobahőmérsékletre hűtött, desztillált vízzel 1 literre hígítjuk, szűrjük és sötét üvegben, üvegdugóval tároljuk. A reagens fényes sárga, stabil a tárolás során. Használat előtt készítsen el egy működő reagens oldatot, desztillált vízzel 1: 1 arányban hígítva. Az oldatban a savkoncentrációnak 1 g ekvivalensnek kell lennie. A vizsgálatot 1 N nátrium-hidroxid-oldattal (indikátor - fenolftalein) végzett titrálással ellenőrizzük.

A tojásfehérje, glicin és fenilalanin (mindegyik 2,5 ml) oldatait három csőbe adjuk, 5 ml C oldatot adunk hozzá és 10 percig hagyjuk, majd 5 ml Folin reagens munkaoldatot öntünk. 30 perc múlva folyadékfestést figyeltek meg: a fehérjét és a fenilalanint tartalmazó vizsgálati csövekben intenzív kék szín alakul ki, és a reagens sárga színét glicint tartalmazó kémcsőben tartják fenn.

Xantoprotein reakció.

Néhány aromás aminosavra (fenilalanin, tirozin, triptofán) jellemző. Ha koncentrált salétromsavval rendelkező fehérjéket és polipeptideket melegítünk, sárga nitrocsoportot képez.

A reakció két lépésben folytatódik. Az első aminosav, például a koncentrált salétromsavval kölcsönhatásba lépő tirozin nitrálása történik. Ez dinitrotirozint eredményez (sárga).

Megjegyzés. A hozzáadott salétromsav mennyiségétől függően dinitro- és nitrotirozin keverék is képződhet.

A második lépésben a tirozin-nitrálás (di-nitro- és nitrotirozin) termékei nátrium-vagy ammónium-sóvá alakulnak, amely sárga-narancssárga színű.

A xantoprotein reakció a fehérjék, peptidek és ciklikus aminosavak mellett számos egyszerű aromás vegyületet (benzol, fenol stb.) Is ad.

Reagensek: a) tojás vagy növényi fehérje oldata (készítmény - lásd a 6. oldalt); b) zselatin oldat; c) tömény salétromsav; d) nátrium-hidroxid, 20% -os oldat vagy ammónia, koncentrált oldat, fenol, oldat.

Óvatosan 2-3 ml fenololdatra (a cső falára) 1-2 ml tömény salétromsavat öntünk. Óvatosan melegítsen, és sárga szín jelenik meg.

1-2 ml tojást vagy növényi fehérje oldatot öntünk egy másik csőbe, 8-10 csepp tömény salétromsavat adunk hozzá és óvatosan melegítjük. A csapadék sárgára változik.

Lehűlés után az ammónia vagy nátrium-hidroxid koncentrált oldatának feleslegét óvatosan (a fal mentén) öntjük a csőbe - a folyadék narancssárga vagy sárga-narancssárga színű.

A reakciót a teher alatt kell végrehajtani!

Ugyanezeket a reakciókat zselatin oldattal végezzük: sárga festés nem következik be, mivel a zselatin nem tartalmaz aromás aminosavakat (néha nagyon gyenge sárgás szín jelenhet meg más fehérjék keveréke miatt).

Reakció Millon.

A Millon reakciója megmutatja az aminosav tirozin jelenlétét. A tirozin vörös nitritrirozin higany sót képez Millon reagenssel. Ez a reakció csaknem minden fenolra jellemző.

Reagensek: a) tojás vagy növényi fehérje oldata (lásd a 6. oldalt); b) 1% zselatin oldatot; c) fenol, 0,1% -os oldat; d) Millon reagens: 40 g higanyot 57 ml koncentrált salétromsavban oldunk először szobahőmérsékleten, majd enyhén melegítjük vízfürdőben. Az oldatot két térfogatnyi vízzel hígítjuk, és az ülepítés után a csapadékból leszívatjuk.

Minden munka a teher alatt történik!

A vizsgálati csőben lévő fenol 1 ml-es oldatához 0,5 ml Millon-reagenst öntünk, gondosan melegítjük. Rózsaszín festés jelenik meg.

1-2 ml tojást vagy növényi fehérjét oldunk be egy kémcsőbe, és 5-6 csepp Millon-reagenst óvatosan melegítünk.

A folyadék vörösre változik, majd tégla-vörös csapadék válik ki.

Ugyanez történik zselatin oldattal is: a vörös festés nem fordul elő, vagy nagyon gyengén jelenik meg (ha a zselatint nem tisztítják más fehérjék keverékéből),

A triptofánra adott reakciók.

A triptofán savas környezetben aldehidekkel reagáltatva színes kondenzációs termékeket képez. Például a glioxilsavval (amely koncentrált ecetsav keveréke) a reakció az alábbi egyenlet szerint megy végbe:

A triptofán hidroxi-metil-furfurál vagy formaldehid reakciója hasonló módon megy végbe.

A kénsav részt vesz ezekben a reakciókban, ami egy víz eltávolító szer.

Adamkevich-reakció. Reagensek: a) friss tojásfehérje (hígítatlan); b) zselatin, 1% -os oldat; c) tömény ecetsav; d) tömény kénsav.

Néhány csepp hígítatlan tojásfehérjét öntünk a csőbe, 1-2 ml tömény ecetsavat (előnyösen jég) adunk hozzá, és óvatosan melegítjük a kicsapódott csapadék feloldásához, majd lehűtjük és (óvatosan) a cső falán, 1 cm-es tömény kénsavval rétegezve, ügyeljen arra, hogy a folyadékok ne keveredjenek. Egy idő múlva egy vörös-lila gyűrű jelenik meg két réteg határán.

Ugyanezt a reakciót hajtjuk végre zselatin oldattal - a festés nem történik meg, mivel a triptofán nem része a zselatinnak.

Reakció a hidroxi-metil-furfuronnal (Schulze - Raspail). Három, a fruktózból koncentrált kénsav jelenlétében leválasztott vízmolekula hidroxi-metil-furfuralsá válik, amely színes kondenzációs termékeket képez triptofánnal. A reakció végrehajtható mind a fruktózzal, mind a

és szacharózzal, amelynek hidrolitikus hasítása egyenlő mennyiségű glükózt és fruktózt szabadít fel.

Reagensek: a) tojás vagy növényi fehérje oldata (készítmény - lásd a 6. oldalt); b) szacharóz, 5% -os oldat; c) tömény kénsav.

1-2 ml fehérjeoldathoz 2-4 csepp szacharózoldatot adunk, és 1 ml koncentrált kénsavat óvatosan helyezünk a cső falára. A folyadékok határán sötét színű (cseresznye) színű gyűrű jelenik meg.

Reakció formaldehiddel. Reagensek: a) tojás vagy növényi fehérje oldata; b) formalin, 5% -os oldat; c) tömény kénsav.

1 ml fehérjeoldathoz egy kémcsőben, adjunk hozzá 2 csepp formalinoldatot, majd óvatosan (a kémcső falán) 1 ml tömény kénsavat, ügyelve arra, hogy a folyadékok ne keverjenek. A folyadék felületén lila vagy lila-vöröses gyűrű jelenik meg.

Reakció argininre (Sakaguchi).

A guanidinszármazékok, mint például az arginin aminosav (guanidin-minovalerinsav), metil-guanidin, glikocianamin (guanidino-ecetsav), nátrium-hipobromittal (NaBrO) és a-naftollal reagáltatva tégla-vörös vagy vörös bíbor kondenzációs terméket képez. A metil-guanidin és a glnkotsiamin nem része a fehérjéknek, ezért a Sakaguchi reakciót az arginin aminosav megnyitására lehet használni.

A hipobromit oxidálószer. Savanyított arginin

egy imino-csoport elvesztése reagál a-naftollal, hogy színezett vegyületet képezzen.

Reagensek: a) tojás vagy növényi fehérje oldata; b) a-naftol. Készítsünk 1% -os oldatot 96% -os etanolban. Használat előtt 10 ml oldatot alkohollal hígítunk 15% -os nátrium-hidroxid-tartalmú mérőlombikban; g) nátrium-hipobromit oldat. 150 g kálium-karbonátot adagolunk kis adagokban 500 ml vízhez, és addig keverjük, amíg a teljes feloldódás megtörténik (óvatosság: az oldódást nagy hőelnyelés kíséri!). A hűtött oldathoz óvatosan (terhelés alatt!), Állandó keverés közben adjunk hozzá 8 ml tiszta brómot. Az oldatot egy sötét lombikban tároljuk üveg dugóval (füstelszívóban). Legfeljebb három hónapig eltartható.

Megjegyzés. A nátrium-hipobromit oldatot laboratóriumi technikus készíti el.

2-3 ml csepp nátrium-hidroxid-oldatot, csepp a-naftol-oldatot adunk 1 ml fehérjeoldathoz, és jól keverjük, majd 1-2 csepp hipobromit oldatot adunk a csőhöz. Bíborvörös festés jelenik meg.

A ként (ciszteint, cisztint) tartalmazó aminosavakra adott reakció.

Három kéntartalmú aminosav ismert: cisztein, cisztin és metionin.

A cisztein és a cisztein és a kén molekulái viszonylag gyengén és könnyen lebonthatók a lúgos hidrolízis során hidrogén-szulfid formájában, amely az alkáliával nátrium- vagy kálium-szulfidokat képez. A szulfidok kölcsönhatásba lépnek az ólom-acetáttal (vagy inkább plumbbittal), hogy kén-dioxidot kapjanak fekete vagy barna-fekete színben. A reakciók a következő egyenletek szerint folytatódnak:

Reagensek: a) tojás vagy növényi fehérje oldata (lásd a 6. oldalt); b) zselatin, 1% -os oldat; c) nátrium-szóda, 15-20% -os oldat; g) ólom-acetát, 1% -os oldat.

Egy vizsgálati csőben 2 ml tojást vagy növényi fehérjét tartalmazó oldatot öntsünk, ugyanazon mennyiségű zselatin oldatot. Adjunk hozzá 1–1,5 ml alkáli oldatot mindkét csőhöz, és óvatosan forraljuk fel, forraljuk 1-2 percig, majd adjunk hozzá 2-3 csepp ólom-acetát oldatot minden csőbe.

Barnafekete vagy fekete folt jelenik meg a kémcsőben tojás (vagy növényi) fehérjével, amelynek intenzitása függ a fehérjeoldat koncentrációjától és cisztein és cisztin tartalmától. A zselatin oldat nem fest. Ez arra utal, hogy a kéntartalmú aminosavak nem képezik a zselatin részét.

http://stu.alnam.ru/book_prk-3

Glicin minőségi reakció

narancs-sárga quinoidszármazék pH = 7,0

Tapasztalat készítése: a reakcióegyenlet megkötése és írása.

Tapasztalja meg 4. Adamkevich-reakciót (a triptofán fehérjékben való jelenlétéhez).

A módszer elve. A triptofánt tartalmazó fehérjék glioxil- és kénsav jelenlétében vörös-lila színt adnak. A reakció azon alapul, hogy a triptofán savas környezetben kölcsönhatásba lép a glioxilsav aldehidjeivel (amely a koncentrált ecetsav keveréke) színes kondenzációs termékek képződésével. A reakció az alábbi egyenlet szerint megy végbe:

A zselatin nem adja ezt a reakciót, mert Nem tartalmaz triptofánt. A színezés a triptofán glioxilsavval való reakciója miatt következik be, amely szennyeződésként mindig jelen van az ecetsavban.

A triptofánnal azonos reakciót végezhetünk ecetsav helyett formaldehid alkalmazásával 2,5% -os tömény H oldattal.2SO4. Az oldatot 2-3 perc múlva keverjük össze. 10 csepp 5% -os nátrium-nitritet adunk hozzá keverés közben. Intenzív lila színeződés alakul ki, ennek alapja a reakció módszere.

A munka sorrendje.

Néhány csepp hígítatlan fehérjét öntünk a csőbe, és 2 ml-t adunk hozzá. jégecet és néhány csepp glioxilsav. Az elegyet enyhén felmelegítjük a képződött csapadék feloldásához, hűtsük le, és erősen megdöntöttük a csövet, és a koncentrált H-t óvatosan öntjük a falra.2SO4 úgy, hogy mindkét folyadék ne keverjen össze.

5-10 perc elteltével a két réteg felszínén vörösvörös gyűrű képződik.

Tapasztalat készítése: a reakcióegyenlet megkötése és írása.

Tapasztalat 5. Ninhidrin reakció.

A módszer elve. a-Aminosavak reagálnak ninhidrinnel, hogy kék-lila komplexet képezzenek (Ruemann purple), amelynek színintenzitása arányos az aminosav mennyiségével. A reakció a rendszer szerint megy végbe:

redukált ninhidrin (hidridin)

kék-lila kondenzációs termék

A ninhidrinnel való reakciót a-aminosavak vizuális kimutatására használják kromatogramokon (papíron, vékony rétegben), valamint az aminosavak koncentrációjának kolorimetriás meghatározására a reakciótermék színintenzitása alapján.

Ennek a reakciónak a terméke tartalmazza az eredeti aminosav R (R) csoportját, amely különböző színű: kék, piros stb. az aminosavak ninhidrinnel történő reakciójából származó vegyületek.

Jelenleg a ninhidrin reakciót széles körben alkalmazzák mind az egyes aminosavak felderítésére, mind a számuk meghatározására.

A munka sorrendje.

A csőbe 1 ml 1-10% -os hígított csirkefehérje-oldatot és 1-2 ml 1% -os ninhidrin-oldatot öntöttünk acetonban. A cső tartalmát összekeverjük és vízfürdőn 2-3 percig melegítjük, amíg kék-lila szín jelenik meg, jelezve az a-aminosavak jelenlétét a fehérjében.

Tapasztalat készítése: a reakcióegyenlet megkötése és írása.

6. tapasztalat. Sakaguchi reakciója.

A módszer elve. Az arginin aminosavra adott reakció az arginin és az naftol kölcsönhatásán alapul oxidálószer jelenlétében. A mechanizmus még nem teljesen tisztázott. Nyilvánvaló, hogy a reakciót az alábbi egyenlet szerint hajtjuk végre:

Mivel a kinon-iminszármazékok (ebben az esetben a nafto-kinon), amelyben az imino-NH-csoport hidrogénatomja alkil- vagy arilcsoporttal helyettesített, mindig sárgás-vörös színben festik, az oldat narancssárga-vörös színe a Sakaguchi-reakció megjelenésének köszönhető. Naftoquinone imine. Nem kizárt azonban, hogy az arginin maradék NH-csoport további oxidációja következtében még egy összetettebb vegyület képződik, és az a-nafol benzolmagja további oxidációja következtében:

A munka sorrendje.

2 ml-re. 2 ml 1% -os hígított csirkefehérje-oldatot adunk hozzá. 10% -os nátrium-hidroxid (NaOH) és néhány csepp 0,2% -os alkoholos alkoholos oldat. A csövek tartalma jól kevert. Ezután 0,5 ml-t öntsünk. Nátrium-hipobromit (NaBrO) vagy nátrium-hipoklorit (nátrium-hipoklorit - NaOCl) keveréke. Közvetlenül van egy piros, fokozatosan növekvő festés.

Azonnal hozzáadunk 1 ml 40% -os karbamid-oldatot a gyorsan fejlődő narancssárga-vörös festés stabilizálásához.

Ez a reakció a guanidin-maradékot tartalmazó vegyületekre jellemző

és jelzi az aminosav arginin jelenlétét a fehérje molekulában:

Tapasztalat készítése: a reakcióegyenlet megkötése és írása.

http://studfiles.net/preview/5920461/page:2/

Ökológus kézikönyv

A bolygónk egészsége a kezedben van!

Reakció ninhidrinnel

Az aminosavakkal végzett ninhidrin reakciót az aminosavak kimutatására és számszerűsítésére használják.

A ninhidrin, amely erős oxidálószer, az aminosavak oxidatív dezaminálódását okozza, ami a CO2 képződéséhez, a megfelelő aldehidhez és a ninhidrin redukált formájához (1) vezet.

A ninhidrin redukált formája a ninhidrin és az NH3 feleslegével reagál. Ez kék-lila terméket képez (2). A reakciók a következők szerint írhatók:

lila kondenzációs termék (2)

haladás: 1 ml fehérjéhez adjunk hozzá 2 ml ninhidrin vizes 1% -os oldatát és forraljuk fel. Kék-lila színű csapadék képződik.

Hozzáadás dátuma: 2015-04-30; Megtekintések: 2291; A közzétett anyag sérti a szerzői jogot? | Személyes adatok védelme |

Nem találta, amit keresett? Használja a keresést:

SZÍNES ÉS NOMINÁLIS MINŐSÉGI REAKCIÓK A PROTEINEKRE

A kémia története az iskolai tanfolyamban

PIOTROVSKY REAKCIÓ (BIURETH REAKCIÓ)

A fehérjékben az aminosavak egymáshoz kapcsolódnak a polipeptidek és a diketopiperazinok típusával. Az aminosavakból származó polipeptidek képződése egy vízmolekula szétválasztásával történik egy aminosav molekula és egy másik molekula karboxilcsoportjának aminocsoportjából:

A kapott -C (O) –NH– csoportot peptidcsoportnak nevezik, a C-N kötést összekötő aminosavmaradékokat peptidkötésnek nevezzük.

Amikor egy dipeptid kölcsönhatásba lép egy új aminosavmolekulával, tripeptidet kapunk, stb.

A diketopiperazinokat két aminosavmolekula kölcsönhatása képezi két vízmolekula eliminálásával:

A diketopiperazinokat N. D. Zelinsky és V. S. Sadikov 1923-ban izolálták a fehérjékből.

Az ismétlődő peptidcsoportok jelenlétét a fehérjében megerősíti az a tény, hogy a fehérjék lila festést adnak kis mennyiségű réz-szulfát oldat hatására alkáli jelenlétében (biuret reakció).

2-3 ml fehérjeoldatot 2-3 ml 20% -os kálium-hidroxid-oldattal vagy nátrium-oldattal és néhány csepp réz-szulfát-oldattal melegítünk. A lila festés a réz és a fehérjékből álló komplex vegyületek képződéséből adódik.

  • Ruemann reakció (Ninhydrin Reaction (1911))

a-Aminosavak reagálnak ninhidrinnel, hogy kék-lila komplexet képezzenek (Ruemann purple), amelynek színintenzitása arányos az aminosav mennyiségével.

A reakció a rendszer szerint megy végbe:

A ninhidrinnel való reakciót a-aminosavak vizuális kimutatására használják kromatogramokon (papíron, vékony rétegben), valamint az aminosavak koncentrációjának kolorimetriás meghatározására a reakciótermék színintenzitása alapján.

Egy kémcsőben 1 ml 1% -os glicin oldatot és 0,5 ml 1% -os ninhidrin oldatot öntünk. A csövek tartalmát óvatosan melegítjük, amíg kék-lila szín jelenik meg.

Az arginin aminosavra adott reakció az arginin és az naftol kölcsönhatásán alapul oxidálószer jelenlétében. A mechanizmus még nem teljesen tisztázott. Nyilvánvaló, hogy a reakciót az alábbi egyenlet szerint hajtjuk végre:

Mivel a kinon-iminszármazékok (ebben az esetben a nafto-kinon), amelyben az imino-NH-csoport hidrogénatomja alkil- vagy arilcsoporttal helyettesített, mindig sárgás-vörös színben festik, az oldat narancssárga-vörös színe a Sakaguchi-reakció megjelenésének köszönhető. Naftoquinone imine.

Nem kizárt azonban, hogy az arginin maradék NH-csoport további oxidációja következtében még egy összetettebb vegyület képződik, és az a-nafol benzolmagja további oxidációja következtében:

2 ml 0,01% arginin oldatot öntünk a csőbe, majd 2 ml 10% -os nátrium-hidroxid-oldatot és néhány csepp 0,2% -os alkoholos alkohol-oldatot adunk hozzá.

Az a-aminosavak spektrofotometriás meghatározása különböző reakciókörülmények között ninhidrinnel

A kémcsövek tartalmát jól összekeverjük, 0,5 ml hipobromit oldatot öntünk és ismét összekeverjük. Azonnal hozzáadunk 1 ml 40% -os karbamid-oldatot a gyorsan fejlődő narancssárga-vörös festés stabilizálásához.

Ez a ciszteinre és a cisztinre adott reakció.

A lúgos hidrolízis során a ciszteinben és a ciszteinben a „gyengén kötött kén” elég könnyen leválasztható, ami hidrogén-szulfid képződéséhez vezet, amely alkáli reagáltatásával nátrium- vagy kálium-szulfidokat eredményez.

Ha ólom (II) -acetátot adunk hozzá, az ólom (II) -szulfid csapadék színe szürke-fekete.

A csőbe 1 ml cisztinoldatot öntünk, hozzáadunk 0,5 ml 20% -os nátrium-hidroxid-oldatot. Az elegyet forrásig melegítjük, majd 0,5 ml ólom (II) -acetát-oldatot adunk hozzá. Szürke-fekete ólom (II) -szulfid csapadék figyelhető meg:

Amikor az a-aminosavak kölcsönhatásba lépnek a formaldehiddel, viszonylag stabil karbinolaminok képződnek - szabad karboxilcsoportot tartalmazó N-metilol-származékok, amelyeket ezután lúggal titrálunk:

Ez a reakció az a-aminosavak kvantitatív meghatározásának alapja a formális titrálás módszerével (Sörensen módszer).

5 csepp 1% -os glicin oldatot öntünk a csőbe, és 1 csepp metil-vörös indikátort adunk hozzá. Az oldatot sárgare festjük (semleges közeg). Az elegyhez azonos térfogatú 40% -os formaldehid-oldatot (formalin) adunk. Piros szín jelenik meg (savas):

  • Zimmerman REAKCIÓ

Ez a glicin aminosavra adott reakció.

A tapasztalat leírása. 2 ml 0,1% -os glicin-oldathoz, amelyet 10% -os lúgos oldat hozzáadásával 8-ra állítottunk be, 0,5 ml o-ftaldehid vizes oldatát adtuk hozzá. A reakcióelegy lassan világos zöld színűvé válik. Néhány perc elteltével zöld csapadék esik ki.

  • A FÉMMEGSZERELÉSEK FORMÁSA

a-Aminosavak komplex nehézfém kationok intracomplex sóival képződnek.

Frissen előállított réz (II) -hidroxiddal enyhe körülmények között minden a-aminosav jól kristályosított, intracomplex (kelát) réz (II) sókat eredményez:

Az ilyen sókban a rézionot az aminocsoportokkal való koordinációs kötésekkel kapcsoljuk össze.

3 ml 3% réz (II) -szulfát-oldatot öntünk a csőbe, néhány csepp 10% -os nátrium-hidroxid-oldatot adunk hozzá, amíg kék csapadék képződik. A kapott réz (II) -hidroxidot 0,5 ml koncentrált glicin-oldatba öntjük. Ez egy sötétkék réz-glicin-oldatot képez:

  • XANTOPROTEIN REAKCIÓ

Ezt a reakciót az aromás csoportokat tartalmazó a-aminosavak kimutatására használjuk.

A tirozin, triptofán, fenilalanin, amikor koncentrált salétromsavval kölcsönhatásba lép, sárga színű nitro-származékokat képez. Lúgos közegben ezeknek az a-aminosavaknak a nitro-származékai narancssárga sókat adnak.

A csőbe öntsünk 1 ml tirozin oldatot és adjunk hozzá 0,5 ml tömény salétromsavat. A keveréket addig melegítjük, amíg sárga szín jelenik meg.

Lehűlés után 1-2 ml 20% -os nátrium-hidroxid-oldatot adunk hozzá, amíg narancssárga színű oldat nem jelenik meg:

  • A PROTEIN MEGHATÁROZÁSA A SÚLYOS FÉMEK SZÁMÁBAN

A tapasztalat leírása. Öntsünk 1-2 ml fehérjetartalmú oldatot két csőbe, és lassan, rázva, cseppenként adjunk hozzá egy csőben telített réz-szulfátoldatot és a másik 20% ólom-acetát oldatot.

A kevéssé oldódó sószerű fehérje-vegyületek kicsapódásának kialakulása. A tapasztalatok azt mutatják, hogy a fehérje a nehézfémek sóival történő mérgezés ellenanyagként szolgál.

  • Az amino-nitrogén felfedezése a fehérjékben

A tapasztalat leírása. Néhány száraz fehérjét, például zselatint száraz csőbe helyezünk. Adjunk hozzá ötször annyi szóda-mészet (a maró szóda és a kalcium-hidroxid keverékét), rázással és melegítéssel keverjük.

Megszabadul az ammónia, ami vízzel megnedvesített kék rózsaszín lakmuspapírt okoz. Ugyanakkor az égett haj illata van, amelyet mindig megfigyelnek a fehérjék égetésénél.

A tapasztalat leírása. A kémcsövet öntjük körül

0,5 ml ólom-acetát-oldatot és kálium-hidroxid-oldatot adunk az így kapott ólom-hidroxid csapadék feloldásához.

Egy másik kémcsőben öntjük

2-3 ml fehérjeoldatot, és ugyanazt a térfogatú öntött vízvezetéket öntsük. Az elegyet 2–3 percig forraljuk. A sötét festés megjelenése ólom-szulfid képződését jelzi.

  • REAKCIÓ A SERO-TARTALMAZÓ A-AMINO-savak előfordulásához

A kéntartalmú α-aminosavakhoz való kvalitatív reakció a rossz reakció.

A ciszteint vagy cisztin-maradékot tartalmazó fehérjék szintén ezt a reakciót adják.

A tapasztalat leírása. Egy kémcsőben 10 csepp tojásfehéroldatot és kétszer 20% -os nátrium-hidroxid-oldatot öntsünk. A cső tartalmát forrásig melegítjük (1-2 perc). 5 csepp ólom (II) -acetát-oldatot adunk a kapott lúgos oldathoz, és a reakcióelegyet ismét forraltuk.

Szürkefehér csapadék figyelhető meg.

A triptofán savas környezetben aldehidekkel reagáltatva színes kondenzációs termékeket képez. Például glikoxilsavval (amely koncentrált ecetsav keveréke) a reakció az alábbi egyenlet szerint megy végbe:

A triptofán és a formaldehid reakciója hasonló módon megy végbe.

A tanulmány során az irodalmi forrásokból a fehérje aminosavakra vonatkozó színminőségi reakciókról rendelkezésre álló információkat találtuk; sorozatos reakciót hajtott végre, és adatbázist állított össze.

Ezt az alapot az iskolai gyakorlatban mind elméleti, mind gyakorlati szempontból lehet használni, mivel rövid, de részletes leírást adunk minden kísérlet végrehajtásáról.

A javasolt 18 minőségi reakció közül mindegyik gyakorlatilag megvalósítható az iskolai kémia tanfolyamán, és gyakorlati jelentőségű. A kémiai egyenletekhez kapcsolódó kísérő reakciók meghatározzák és mélyítik a biológiai és szerves kémiai ismereteket, különösen a speciális biológiai és kémiai osztályok diákjainak ismereteit.

Használt irodalom

Ermakov A.N., Arasimovich V. V., Smirnova-Ikonnikova M.I., Mirri I.K.

A növények biokémiai vizsgálatának módszerei. M., 1952, 520 p.
Polyanskaya A.S., Sheveleva A.O. Laboratóriumi munkák módszertani fejlesztése: "Aminosavak" és "Fehérjék". L., 1976, 37 p.
Pustovalova L.M.

A biokémiai műhely. 1999, 541 s.
Útmutató a szerves kémia gyakorlati osztályaihoz. Ed. V. M. Rodionov.

M., 1954, 111 p.
Soloviev N.A. Laboratóriumi munkák a biológiai kémia területén. Módszertani fejlesztés. SPb., 70, p.
Filippovics Yu.B., Egorova T. A., Sevastyanova G.A. Az általános biokémiai műhely. M., 1982, 311 p.

Z. Saitov, S. V. Teleshov, B. Kharitontsev,
Szakasz "Fiatal kémikus" RCS őket.

D. Mendeleev (Tobolsk)

Az aminosavak, peptidek, fehérjék minőségi reakciói

Az aminosavak színreakcióval detektálhatók: ninhidrin, xanthoprotein, Foll, Milon, biuret minták stb.

Ezek a reakciók nem specifikusak az aminosavak szerkezetében lévő egyes fragmensek kimutatásán alapul, amelyek más vegyületekben előfordulhatnak.

Ninhidrin reakció, színreakció, aminosavak, aminosavak és aminok minőségi és mennyiségi meghatározására. Lúgos közegben, ninhidrinben (triketohidrin nyndrate, C9HbO4) melegítve primer aminocsoportokat tartalmazó (-NH2) anyagokkal, olyan termék képződik, amely stabil, intenzív kék-lila színnel rendelkezik, maximális felszívódása körülbelül 570 nm.

Mivel az ilyen hullámhosszon történő felszívódás lineárisan függ a szabad aminocsoportok számától, a ninhidrin reakció alapja volt a mennyiségi meghatározásnak kolorimetriával vagy spektrofotometriával. Ezt a reakciót alkalmazzuk a szekunder aminocsoportok (> NH) meghatározására a prolin és a hidroxi-prolin aminosavaiban; ebben az esetben fényes sárga termék keletkezik.

Érzékenység - 0,01% -ig. A modern automatikus aminosav-analízist az aminosavak ioncserélő szétválasztásának és a ninhidrin-reakcióval történő mennyiségi meghatározásuk kombinálásával végezzük.

Az aminosavak keverékeinek papírkromatográfiával való elválasztásakor minden aminosavat legalább 2–5 μg mennyiségben lehet meghatározni.

A szín intenzitása az aminosavak mennyiségének megítéléséhez használható.

Ez a reakció nemcsak szabad aminosavakkal, hanem peptidekkel, fehérjékkel stb.

A xantoprotein reakció lehetővé teszi aromás aminosavak (fenilalanin, tirozin, hisztidin, triptofán) kimutatását az aromás mag elektrofil szubsztitúciójának reakciója alapján (nitrálás).

Koncentrált salétromsav hatására például tirozinra sárga színű terméket kapunk.

Reakcióhiba. Ez a ciszteinre és a cisztinre adott reakció.

A lúgos hidrolízis során a ciszteinben és a ciszteinben a „gyengén kötött kén” elég könnyen leválasztható, ami hidrogén-szulfid képződéséhez vezet, amely alkáli reagáltatásával nátrium- vagy kálium-szulfidokat eredményez. Ha ólom (II) -acetátot adunk hozzá, az ólom (II) -szulfid csapadék színe szürke-fekete.

A tapasztalat leírása. A csőbe 1 ml cisztinoldatot öntünk, hozzáadunk 0,5 ml 20% -os nátrium-hidroxid-oldatot.

Az elegyet forrásig melegítjük, majd 0,5 ml ólom (II) -acetát-oldatot adunk hozzá. Szürke-fekete ólom (II) -szulfid csapadék figyelhető meg:

Zimmerman reakció. Ez a glicin aminosavra adott reakció.

A tapasztalat leírása. 2 ml 0,1% -os glicin-oldathoz, amelyet 10% -os lúgos oldat hozzáadásával 8-ra állítottunk be, 0,5 ml o-ftaldehid vizes oldatát adtuk hozzá.

A reakcióelegy lassan világos zöld színűvé válik. Néhány perc elteltével zöld csapadék esik ki.

Reakció a triptofánra. A triptofán savas környezetben aldehidekkel reagáltatva színes kondenzációs termékeket képez. Például glikoxilsavval (amely koncentrált ecetsav keveréke) a reakció az alábbi egyenlet szerint megy végbe:

A triptofán és a formaldehid reakciója hasonló módon megy végbe.

Sakaguchi reakciója. Az arginin aminosavra adott reakció az arginin és az a-nafol kölcsönhatásán alapul oxidálószer jelenlétében.

A mechanizmus még nem teljesen tisztázott. Nyilvánvaló, hogy a reakciót az alábbi egyenlet szerint hajtjuk végre:

Mivel a kinon-iminszármazékok (ebben az esetben a nafto-kinon), amelyben az imino-NH-csoport hidrogénatomja alkil- vagy arilcsoporttal helyettesített, mindig sárgás-vörös színben festik, az oldat narancssárga-vörös színe a Sakaguchi-reakció megjelenésének köszönhető. Naftoquinone imine.

Nem kizárt azonban, hogy az arginin-maradék NH-csoport további oxidációja következtében még bonyolultabb vegyület képződik, és az a-naftol benzolmagja további oxidációja következtében:

2 ml 0,01% -os arginin oldatot öntünk a csőbe, majd 2 ml 10% -os nátrium-hidroxid-oldatot és néhány csepp 0,2% -os alkoholos alkohol-oldatot adunk hozzá. A kémcsövek tartalmát jól összekeverjük, 0,5 ml hipobromit oldatot öntünk és ismét összekeverjük. Azonnal hozzáadunk 1 ml 40% -os karbamid-oldatot a gyorsan fejlődő narancssárga-vörös festés stabilizálásához.

Biuret reakció - színreakcióként a fehérjékhez. Lúgos közegben réz (II) sók jelenlétében lila színt adnak.

A szín a réz (II) komplex vegyület képződéséből adódik, ami a fehérjékre jellemző "-CO-NH-" peptidcsoportnak köszönhető.

Tapasztalat 5. A glicin és a ninhidrin reakciója.

Ezt a reakciót karbamidszármazékból, biuretből kapta meg, amely akkor keletkezik, amikor a karbamidot ammónia eltávolításával melegítjük:

A fehérjék és a biuret mellett ugyanez a festés más vegyületeket is tartalmaz, amelyek a következő csoportot tartalmazzák: amidok, karbonsavak imidjei, valamint a molekula-CS-NH- vagy = CH-NH- csoportot tartalmazó vegyületek. Szintén a fehérjék, néhány aminosav, peptid, biuret és közepes pepton adja a reakciót.

A különböző peptidekkel végzett biuret reakcióval kapott komplex színe némileg eltérő, és a peptidlánc hosszától függ.

Négy aminosav-maradékot tartalmazó peptidek és a fentiek szerint vörösvörös komplexet képeznek, a tripeptidek lila, a dipeptidek kékek.

a polipeptid keton formája

polipeptid enol formája

Amikor egy polipeptid kölcsönhatásba lép Cu (OH) 2-vel, egy komplex képződik, amelynek szerkezete a következőképpen látható:

Hozzáadás dátuma: 2016-11-04; Megtekintések: 22 631;

Kapcsolódó cikkek:

A csőben 4 csepp 0,2 N glicin oldatot és 2 csepp 0,1% -os ninhidrin oldatot helyezünk. Óvatosan melegítse fel a cső tartalmát, amíg meg nem jelenik a kék-piros szín.

Milyen aminosavak észlelhetők a ninhidrinnel történő reakcióval?

2. Milyen célokra használható ez a reakció kvalitatív elemzésben?

FÜGGETLEN MEGOLDÁSOK FELADATAI

1. A fehérjemolekulák térszerkezetének kialakításakor az a-aminosavak nem-poláris radikái a makromolekula belsejében helyezkednek el, és a poláris és ionogén gyökök a felületen vannak. Vegyük a következő aminosavakat nem poláris (hidrofób) és poláris (hidrofil); magyarázza el választását: Tre, Tsis, Fen, Három, Pro, Gln, Ser, Met, Ley.

Írja be a strukturális képleteket, és válasszon a következő aminosavak közül, amelyek pozitívan és negatívan töltődnek.

NINGHYDRINE REACTION

Írjon sémákat vízbe történő ionizálásukra:

Asp, Arg, Gis, Glu, Liz, Asn, Gln, Gli, Tir.

3. A természetes fehérjék összetételében csak L-aminosavak találhatók. Írja be Fisher kivetítésének formájában a valin, cisztein, izoleucin lehetséges konfigurációs sztereoizomerjeit. Jelölje D-és L-sztereoizomereket.

4. A D- és L-a-alanin racém elegyének szétválasztása céljából az N-acilezett termékét az aciláz enzimmel kezeljük, és az enantiomerek egyikét vizes HCl-oldattal extraháljuk.

Milyen enantiomer képződik az enzim hatása alatt oldatban, szabad, nem acilezett formában? Írja meg a reakció kialakulásának és a HCl-vel való kölcsönhatásnak a reakcióját.

A metionin (pKa 5,75) és a hisztidin (pKa 7,58) a májbetegségek kezelésére és megelőzésére szolgál. A pKa-értékek segítségével határozzuk meg, hogy a felsorolt ​​aminosavak milyen ionos formában lesznek a vérben (pH 7,3-7,5).

Az esszenciális aminosavakat triptofán (pKa 5.88) és lizin (pKa 9,74) embernek kell bevenni. A pKa-értékek segítségével határozzuk meg, hogy mely ionos formában vannak jelen a gyomorban (pH

1) és a vérben (pH 7,3-7,5).

7. A fehérje tápláláshoz 13 aminosavból álló poliamint, beleértve az arginint (pKa 10.76) és a leucint (pKa 5.98), intravénásan adják be a betegeknek. A pKa-értékek segítségével határozzuk meg, hogy a felsorolt ​​aminosavak milyen ionos formában lesznek a vérben (pH 7,3-7,5).

A cisztein-tiolcsoport a fehérjék egyik legreaktívabbja, és különösen erősen módosított. Az enzimaktivitás megjelenésében betöltött szerepének tisztázása érdekében a tiolcsoportot jód-ecetsavval (I-CH2COOH) és jód-acetamiddal (I-CH2CONH2) történő alkilezéssel módosítjuk. Írja be a reakcióegyenleteket, nevezze meg az ebben a folyamatban részt vevő reakcióközpontokat, a reakció típusát és mechanizmusát.

Az aminosavmaradékok módosítása segít meghatározni azok lokalizációját vagy a biológiai funkció megvalósításában való részvételt. Közelebbről, radioaktív nedves ecetsavanhidridet alkalmazó acilezést javasolunk a fehérje-globulum felületén található lizin-maradékok lokalizációjának meghatározására. Írja be az acilezési reakció sémáját.

10. Az A-aminosav-észterek illékonyak, és az a-aminosavak gáz-folyadék kromatográfiával történő elválasztására szolgálnak.

Írjunk egy rendszert a treonin-észter kialakítására, adja meg a reakció típusát és mechanizmusát, írja le annak mechanizmusát.

11. A dekarboxiláz enzimek testben való részvételével az aminosavakat dekarboxilezzük, hogy biogén aminokat képezzenek. Írja be a hisztidin és triptofán dekarboxilezési reakciók vázlatait.

Nevezze meg a reakciótermékeket, írja le azok biológiai szerepét.

12. Az aminosavak kvantitatív elemzésében Van-Slyka és Sørensen módszerét használtuk. Írja be az ezen módszerek alapjául szolgáló reakciósémákat.

13. A peptidek szerkezetének megállapításához az aminosavak feniltiohidantoin-származékai képződnek.

Írja be a reakcióvázlatokat az ilyen származékok előállítására valinra és aszparaginsavra. Adja meg a reagenst.

14. Az aromás aminosavak - xanthoprotein reakitsya - kvalitatív reakciója a nitro-vegyületek képződésén alapul a salétromsav hatására. Írjunk reakciót a tirozin nitrálására. Adja meg a reakciómechanizmust.

15. A koenzim A bioszintézisének kezdeti szakaszában (HS-KoA) az aszparaginsav b-alaninná dekarboxilálódik, amely egy amidot képez pantoikus (2,4-dihidroxi-3,3-dimetil-butánsav)-pantoténsavval.

Írj reakcióvázlatokat.

16. A transzamináció az a-aminosav bioszintézis fő útja, amelyet transzamináz enzimek (aminotranszferázok) és piridoxál-foszfát koenzim részvételével végeznek. Ebben a folyamatban a piridoxál-foszfát közreműködik az aminocsoport egy aminosavból az oxo-savba történő átvitelében. Írjunk be minden piridoxál-foszfátot tartalmazó reakciórendszert a cisztein transzaminálásának folyamatában az a-oxoglutarinsav részvételével.

A miokardiális infarktusos betegek szérumában alanin transzamináz jelenlétében vagy hiányában megítélhető a kezelés eredménye. A szérumhoz adjunk a-alanint és a-oxoglutársavat. Milyen ételeket termelnek, ha alanin transzamináz van jelen?

A vérben (és vizeletben) fenilketonuriában szenvedő gyermekeknél megnövekszik a fenilalanin és transzformációs termékeik tartalma, amelyek a fenilalanin szekvenciális transzaminálásakor keletkeznek oxo-sav (A) képződéséhez, redukció (A) hidroxisav (B) képződéséhez, a dekarboxilát (B) képződéséhez. (C). A (C) kis része a megfelelő savvá oxidálódik, amely a vizelettel glutaminnal komplexként választódik ki.

Írja be a fenilalanin fenilketonuriában történő szekvenciális átalakítására szolgáló sémákat. Nevezze meg a köztes termékeket.

19. Adja hozzá az aminosav-metabolizmus következő reakcióit:

a) arginin + a-oxoglutarinsav

b) valin + a-oxoglutarinsav

g) piruvinsav + NAD H + + NH3

Az emberek valinális katabolizmusa a következő lépéseket tartalmazza (a megadott sorrendben):

1) Átültetés, ami az (A) -oxo-sav képződéséhez vezet.

2) Az (A) oxidatív dekarboxilezése HS-CoA jelenlétében, ami egy tioéter (B) képződéséhez vezet.

3) Dehidratálás (B) a telítetlen származék (C) képződésével.

4) Hidratáció (C) a Markovnikov szabályával az oktatással (D).

5) A tioéter (D) hidrolízise a szabad sav (D) előállításához.

6) A (D) anyag primer alkohol-hidroxidjának NAD + függő oxidációja aldehidsav (E) kialakulásával stb.

Írja be ezeket a reakciókat és adja meg a köztes termékeket.

15. SZAKASZ.

PEPTIDES ÉS PROTEINS.

CÉL: A tudás létrehozása:

- a peptidek és fehérjék szerkezeti felépítésének elvei;

- a peptidek és fehérjék elsődleges szerkezete, meghatározási módszerei;

- a polipeptidlánc térbeli szervezése;

- sav-bázis tulajdonságok és peptidhidrolízis;

- peptidszintézis in vitro.

- írja fel a di- és tripeptidek szerkezetét az a-aminosav képletek ismeretében;

- meghatározza a peptidek izoelektromos pontját;

- a peptidek különböző ionos formáit ábrázolják a közeg pH-jától függően;

- a peptidekre és a fehérjékre jellemző jellegzetes és minőségi reakciók végrehajtása.

KÉRDÉSEK A Kreatív képzéshez

A peptidek és fehérjék biológiai funkciói.

2. A peptidek és fehérjék szerkezeti felépítésének elve. A peptidkötés elektronikus szerkezete és tulajdonságai.

A peptidek tulajdonságai. A peptidek izoelektromos állapota és izoelektromos pontja, a peptidek savas és lúgos hidrolízise.

4. A peptidek és fehérjék elsődleges szerkezete. Edman aminosav-szekvencia meghatározása (fenil-izotiocianát-módszer).

5. A peptidek in vitro szintézise a funkcionális csoportok "aktiválásának" és "védelmének" módszerével.

A peptidszintézis stratégia fogalma.

6. A peptidek és fehérjék másodlagos szerkezete. A polipeptidláncok rendszeres a-hélix és b-szerkezeti régiói. A fehérjék tercier és kvaterner szerkezetének fogalma.

7. A komplex fehérjék fogalma.

Hemoglobin, szerkezet, tulajdonságok, érték.

IRODALOM:

[1]. Tyukavkina N., Bioorganikus kémia. / N.A. Tyukavkina, Yu.I. Baukov - M.: Medicine, 1991.– S.

[2]. Hydranovich L.G. Bioorganikus kémia: tankönyv. juttatás. /L.G.Gidranovich. - Vitebsk: VSMU, 2009.– S.

[3]. Hydranovich L.G. Laboratóriumi osztályok a bioorganikus kémia területén. kézikönyv / L. G. Gidranovich. - Vitebsk: VSMU, 2012.– P.107-113.

[4]. Hydranovich L.G. A bioorganikus kémiai előadások kurzusa Vitebsk.– 2003.– P. 197-210.

AZ ÜZLETI ELŐKÉSZÍTÉSEK ELLENŐRZÉSÉNEK FELADATAI.

1. Készítsen elméleti anyagot az osztályok önálló tanulásának kérdéseiről.

A laboratóriumi munka jegyzőkönyvének kiadása.

3. A laboratóriumi műhely 111-113. Oldalán bemutatott problémák megoldása 1-6,9,14.

A végső ellenőrzés megközelítő változata:

Írja be a His-Pro dipeptid ionos formáit pH = 1,0 és 7,5 értéken.

2. Írási reakciósémák, grafikusan aktív reakcióközpontok kijelölése, ahol lehetséges, jelezze a reakciók típusát és mechanizmusát:

A LABORÁCIÓS GYAKORLATI TUDOMÁNY TARTALMA.

A ninhidrin-reagens könnyen oxidálható és sötétebb lesz, ha világít és levegővel érintkezik. Hidegben, sötétben és nitrogén alatt kell tárolni. Még a legrövidebb reagenscsöveket is védeni kell a levegő diffúzióját a falakon keresztül egy speciális bevonattal. A ninhidrin visszaállításához ón-kloridot adnak a reagenshez. Ebből egy oldhatatlan csapadék fokozatosan halmozódik fel a csövekben.
A ninhidrin reagens előállítása: 375 ml etilén-glikol-monometil-étert (TU 6-09-4398-77) adunk egy 1 literes narancssárga üvegedénybe (125 ml nátrium-acetát-puffer pH 5-t adunk hozzá), nitrogént keverés közben mágneses keverőn vezetünk 10 percen belül, majd 10 g ninhidrint adunk hozzá, és a nitrogént 10 percen át ismét átmossuk, miközben a keverést mágneses keverőn folytatjuk, amíg a ninhidrin teljesen fel nem oldódik.

Ezután adjunk hozzá 19 gramm ón 2-víz-dikloridot és keverjük össze.
A ninhidrin reagens előállítása: 40 mg SnQ2 2Н2О-t feloldunk 25 ml citrát pufferoldatban, és hozzáadunk 0 mg ninhidrint, amelyet előzőleg 12 5 mp metil-cellulózban oldunk.
A megnyilvánulást ninhidrin reagenssel végezzük. Ezután az üveglapot az adszorbenssel kemencében melegítjük 30 percig 110 ° C-on.
Az amin kromatogramját ninhidrin reagenssel mutatjuk be, és ninhidrinnel végzett nedvesítés után a papírt 5 percig 105 ° C-on melegítjük, hogy intenzív lila színt kapjunk.
A Technicon Chromatography Co. cég autoanalyzer cégéből készült ninhydrin elemző rendszer

Ezután egy ninhidrin reagenst adunk a mintához, hasonlóan az összetételhez, mint a p.
A prolin meghatározásához ninhidrin reagenst készítünk, amely 40 ml 6 M H3PO4-t, 60 ml jégecetet és 2,5 g ninhidrint tartalmaz 100 ml keverékenként.

A ninhidrin feloldásához ezt a keveréket 70 ° C-ra melegítjük vízfürdőben.
A Technicon Chromatography Co. cég autoanalyzer cégéből készült ninhydrin elemző rendszer Ezután egy ninhidrin reagenst adunk a mintához, hasonlóan az összetételhez, mint a p.
Az utolsó nehézséget ón-kloridot tartalmazó ninhidrin reagens alkalmazásával sikerült leküzdeni.

Az automatikus berendezés működésének egyik fontos jellemzője, hogy rendkívül állandó háttér: 0,001 egységnyi optikai sűrűség minden csúcs előtt és után. Már 1/10 mikromól oldott anyaggal is kielégítő eredményeket érhetünk el; a szivárgási térfogatok kiváló reprodukálhatósága miatt lehetséges az alacsony koncentrációban jelen levő keverék összetevőinek azonosítása.
Vékonyréteg-kromatográfia alkalmazása az oszlopok preparatív elválasztásának vizsgálatára (Am.

Chem. Soc. Kis mennyiségű aminosavat adtunk át ninhidrin reagenssel. A szakaszokra osztott zónákat TLC-vel elemeztük.
Rosen [16] javította Pied és Morris módszerét [30], és néhány változtatást hajtott végre a ninhidrin reagens összetételében, ami lehetővé tette a stabilabb eredmények elérését és ezen túlmenően az eljárás egyszerűsítését.
A tényleges detektálási határ alacsonyabb, és bizonyos mértékig függ a ninhidrin reagens alkalmazását követő szárítási körülményektől.

A mintát (0 ml), ha szükséges, 2 ml pufferrel hígítjuk, és 2 ml ninhidrin reagenssel keverjük össze.
Petri; 7) NaHCO3; 8) 5% - naya PbNO3 vagy Pb (СН3СОО) 2; 9) Salkovsky reagens; 10) Ehrlich reagens; 11) ninhidrin reagens; 12) Nessler reagense; 13) humusz talaj; 14) friss csillagfürt levelek vagy más hüvelyes szárított levelek; 15) hal, húsliszt vagy húsdarab, hal.
A tenyésztő oldatot szűrőn vagy kromatográfiás papírra vágjuk, húzott orrú mikropipettel (10-20 csepp egy pontban), szárítsuk meg a ventilátoron, csepegtető Salkovsky, Ehrlich vagy ninhidrin reagensen.

Ehrlich-reagens lila festést eredményez indolszármazékokkal.
Két módszer az aminosavak szintézisére. Az aminosavakra adott kényelmes reakció a ninhidrinnel való kölcsönhatás (12.5. Ábra); a reakciótermék erősen konjugált és ezért erősen színezett. A ninhidrin reagenseket aminosavfoltok kimutatására használják lemezeken vagy papíron végzett kromatográfia során, valamint aminosavak kolorimetriás kvantitatív meghatározására.
Az elúciós pufferoldatokat a tartalék palackokról a légtelenítő eszközön keresztül vezetjük le, és ioncserélő oszlopokon keresztül állandó sebességgel injektáljuk.

A ninhidrin reagenst az A pontban lévő szennyvízbe szivattyúzzuk, az eluátum és a ninhidrin keveréke a teflonból egy forró vízfürdőn át halad át, hogy az aminosavak és a ninhidrin kölcsönhatása által képződött szín alakuljon ki. A színes oldat extinkciós értékeit folyamatosan mérjük egy fotometrikus egységben, felvevővel, / - olajjal; 2 - csatlakozás a vízfürdőhöz (50); 3 - légnyomás 25 cm; 4 - ioncserélő oszlopok; 5 - ninhidrin tartály; 6 - nitrogén; 7 - levegő; S - olaj; 9 - a szolenoid kronométere; 10-szintes mutató; / / - polc, a légtelenítő felett 20 cm; 12 deaerátor; 13 - szelep, állítható mágnesszelep; 14 szivattyú 1; 15 - 2. szivattyú; 16 - 3. szivattyú; 17 - többutas daru; 18 - puffertartály; 19 - fűtés; 20 teflon tekercs; 21 - fotométer; 22-csatorna a mosogatóba; 23 - mérőműszerek; 24 - áramsebesség mérő; 25 légnyomás 10 cm; 26 - időszámláló; 27 - felvevő készülék.
A ninhidrin-reagens mellett más reagensek is előállíthatók, amelyek színes aminosavakat tartalmaznak.

A szelektív festés ezt a tulajdonságát gyakran használják kromatográfiában az egyes aminosavak azonosítására. Tehát a guanidin-csoporttal (argininnel) rendelkező vegyületek meghatározására Sakagushi reakciót alkalmazzuk.
E módszer szerint a kromatográfiás papírlap közepén peptidek keverékét alkalmazzuk, az elektroforézist 3 6 vagy 6 5 pH-értékű pufferben végezzük, a kapott sávot paraframe-savval kezeljük, hogy a polycystin-maradékokat ciszteinsavvá alakítsuk, majd az elektroforézist azonos körülmények között megismételjük. merőleges irány.

Amikor a kapott térképet a ninhidrin reagens fejlesztette ki, a ciszteinsavat tartalmazó peptidek az átlón kívül találhatók.
A festés reakciója az összes aminosav esetében leírt, kivéve a prolint, amely egy imino-sav.

Ugyanakkor a Proline szintén reagál a ninhidrin reagenssel, és megfelelően színes terméket képez, amelynek implicit módon kifejezett abszorpciós maximumja 440 nm-en van. Ebben a tekintetben a modern aminosav-analizátorok olyan denzitométerekkel vannak felszerelve, amelyek az oldat felszívódását (a reakcióhélix után) egyidejűleg rögzítik két hullámhosszon: 570 és 440 nm.
Az M. A. Klisenko és A. M. Shmigidina (VNIIGINTOKS) által javasolt acrex és karatan maradékok meghatározására szolgáló módszer alapja a szerves oldószerrel való elkülönítés, annak desztillálása és kromatográfia egy vékony KSK szilikagél cinkporral.

A foltokat a termékek amino-vegyületté történő redukálásával érzékelik, amelyek a ninhidrin-reagensben nyilvánulnak meg.
A nátrium-hidroxidot és azok tartalmát vákuumban egy éjszakán át szárítjuk. Ezután 1 ml ecetsavat és 1 ml ninhidrin reagenst öntünk a csövekbe. A csövek tartalmát 100 ° C-os vízfürdőben 1 órán át melegítjük, a csövekhez 1 ml ecetsavat adunk és szobahőmérsékletre hűtjük. Ezután a rózsaszín folyadékot más csövekbe visszük át, és a maradék pigmentet papírból jégecettel extraháljuk.

Az optikai sűrűség meghatározását spektrofotométeren, 515 Mx-en vagy FEK-M fotoelektrokoloriméteren, kék fényszűrővel végezzük a kontrollhoz képest. A kontrolloldatok előállításához olyan papírdarabokat használunk, amelyeket a kromatogramok ugyanazon szakaszaiból vágunk, mint a prolin kimutatott foltjait.

A csövek felmelegítése után a színek állandóan csak egy óráig maradnak fenn, így a színmérést ezen idő alatt kell elvégezni.
Az aminosavak és más fontos amino-vegyületek eloszlását az 1. ábrán mutatjuk be.

18 esetben a papírra felvitt aminosavakat spektrofotometriás meghatározással detektáltuk egy módosított ninhidrin-reagenssel (lásd p. A glicin és a szerin után a kromatogram ellentétes irányban végzett kromatográfiája a P - E - FF oldószerrel mutatva) fotometriai értékeket kaptunk. a minták közvetlen elemzésében talált értékek 82% -a és 75% -a.
A módszer alapja a peszticid szerves oldószerrel történő extrahálása a vizsgálati mintából, az oldószer ledesztillálása és a minta vékony, KSK szilikagél cinkporral történő kromatografálása.

A gyógyszerek lokalizációs zónáinak kimutatását a lemezen úgy állítjuk elő, hogy azokat amino-vegyületekre melegítjük, és az utóbbit a ninhidrin-reagensben nyilvánítjuk. A módszer az acrex és a kara-tan meghatározására specifikus. Más nitrofenolok nem zavarják a meghatározást.
Eszköz és papírlemez körkörös kromatográfiához.

Néhány esetben a szín megőrzése érdekében a már kifejlesztett kromatogramot a második reagenssel permetezzük, vagy a megfelelő vegyületet a reagens indikátor kezdeti oldatába vezetjük be. Például, ha az aminosav foltokat ninhidrinnel detektáljuk, a lila foltok szobahőmérsékleten egy napig eltűnnek.

Ha kadmium-acetátot vezetnek be a kezdeti ninhidrin-reagensbe, vagy a ninhidrinnel történő kimutatás után, a foltokat nikkel-acetát oldattal permetezzük, a színt öt évig megőrzik.

Az oszlopon maradt aminosavakat 80 ml 2 n ammóniaoldattal eltávolítjuk, és a koncentrátumot vízfürdőben szárazra pároljuk.

A száraz maradékot két milliliter vízzel, egy milliliter ninhidrin-reagenssel és 5 ml butil-alkohollal 50-100 ml-es reakcióedénybe visszük át, és két csepp telített kadmium-klorid-oldatot adunk hozzá. A kúpok tartalmát forró vízben, pontosan 15 percig melegítettük.
Ez a tanulmány egy autoanalizátor alkalmazását írja le az aminosavak kromatográfiás elválasztására. Az autoanalizátorba az ioncserélő gyantával ellátott elválasztó oszlopot az egyik blokkként vezetjük be.

Az elúciós oldatot az oszlopon keresztül pumpáljuk, az ninhidrin reagenst adagoljuk, és a hőmérsékletet szabályozzuk a víz elvezetésére az elválasztó oszlop köpenyén.

Ninhidrin reakció

A ninhidrin reakciót az autoanalizátor áramlási reaktorban hajtjuk végre.
A fotometrikus oldatot a küvettán keresztül az alulról felfelé tápláljuk, mivel ez megkönnyíti a küvettában lévő légbuborékok kilépését az oldatból. A meghatározott mennyiségű gyanta alkalmas 18 liter puffer eltávolítására NH3-ból, majd a gyantát NaOH-oldattal kell regenerálni. Ehhez a ninhidrin reagens fogyasztását (30 ml / óra 15 ml / óra helyett) meg kellett duplázni a Stein és Moore módszerhez képest, ahol azonban a metil-cellulóz-tartalom valamivel csökkent a reakciótermékek oldhatóságának javítása érdekében.

Ez az összeg elegendő négy teljes elemzéshez.
KU-2 H-formában 10-12 csepp sebességgel 1 perc alatt. Ezután az aminosavakat eltávolítjuk 80 ml IN ammóniaoldatból (5 - 6 csepp 1 perc alatt.

A kapott csapadékot 2 ml desztillált vízzel (3-4 adagban) őrölt dugóval ellátott 50 ml-es reakcióedénybe helyezzük, 1 ml ninhidrin-reagens, 1-2 csepp telített kadmium-klorid-oldatot és 5 ml butil-alkoholt adunk hozzá. Az üvegkúpokat gyenge gumi gyűrűkkel rögzítik, és pontosan 15 percig helyezik el.

Lehűtés után az elegyet egy gradiens centrifugacsőbe visszük át, amelyben 1 ml Rochelle-sóoldatot öntünk; Az alkoholréteget 6 ml-re állítjuk, a cső tartalmát megrázzuk (a kadmiumkomplexet megsemmisítik, és az alkoholos oldat vörös színűje kék-lila színűvé válik) és centrifugáljuk.
A kloroform desztillálása után a lombik tartalmát 0 ml n-hexánban vagy dietil-éterben oldjuk, és a lemezre kapilláris pipettával felvesszük.

A műveletet 3 - 4-szer megismételjük, minden alkalommal az első pont közepére helyezve az oldatot úgy, hogy az ne haladja meg az 1 cm-es átmérőt, a mintavételi pont mellett (bal és jobb) 2 cm távolságban alkalmazzon egy standard oldatot, amely tartalmazza a mintában lévő peszticidek becsült mennyiségét.. Az oldószer elülső 10 cm magasságú emelését követően a kromatográfiát leállítjuk, a lemezt 5-10 percig füstelszívóba helyezzük az oldószergőz eltávolítása céljából, nedves állapotba permetezve ninhidrin reagenssel és 100 ° C hőmérsékletű szárítószekrénybe helyezzük 5-7 percig.

A kémiai minta festékének és színének vizuális összehasonlításával előállított gyógyszerek mennyiségi meghatározása a standard oldat foltjaival.
A fotometrikus oldatot a küvettán keresztül az alulról felfelé tápláljuk, mivel ez megkönnyíti a küvettában lévő légbuborékok kilépését az oldatból.

Használat előtt 5 ml tiodiglikolt adunk a pufferoldathoz, A jelzett mennyiségű gyanta alkalmas 18 l pufferoldat NH3-ból történő kiürítésére, majd a gyantát NaOH-oldattal kell regenerálni, így a ninhidrin-reagens (30 ml) fogyasztása megduplázódott a Stein és Moore módszerhez képest. / óra, 15 ml / óra helyett), amelyben azonban a metil-cellulóz-tartalom valamivel csökkent a reakciótermékek oldhatóságának javítására.

Ez az összeg elegendő négy teljes elemzéshez.
A 0 32 X 30 cm nagyságú nagynyomású acéloszlopot egy В ТС 2712 cégcserélő tölti ki, amelynek átlagos szemcsemérete 8 mikron. Az oszlop az elektromos fűtőberendezés (8) belsejében található, amely ventilátorral (21) van felszerelve a gyors hűtéshez.

Egy keverő (9) van az oszlop kiömlőnyílásánál, ahol ninhidrogén reagenst adagolunk a hűtött rekeszben lévő üvegből (N) a szivattyúval (11). Az adagolást mikrométeres csavarral szabályozzuk. Mivel ez a szivattyú a légköri nyomás oldalán az oszlop kiömlőnyílásához van csatlakoztatva, hogy elkerüljük a ninhidrin reagens szivárgását, amikor a műszert kikapcsolják, a szelep (10) blokkolja a reagens adagolását a szivattyúhoz.

http://ekoshka.ru/reakcija-s-ningidrinom/
Up